肝纤维化相关的肝窦毛细血管化过程中Slit2-Robo1对VEGF表达的影响

Hepatic sinusoidal capillarization is an early event during hepatic fibrosis. The increase of VEGF level promote the hepatic sinus capillarization. However, the mechanism of VEGF in hepatic fibrosis needs to be further discussed. .Present studies have found that hepatic sinusoidal capillarity in liver fibrosis is closely related to the expression of Slit2-Robo1, PI3K/AKT signaling pathway and VEGF in liver fibrosis. Slit2-Robo1 can affect VEGF expression through the PI3K/AKT signaling pathway at the cellular level. Therefore, we hypothesized that the Slit2-Robo1 signaling pathway may affect the hepatic sinus capillarification during hepatic fibrosis by regulating the expression of VEGF. This topic will therefore study the roles of Slit2-Robo1 and VEGF signaling pathway in hepatic sinusoidal capillarization through C57BL / 6 mice, Slit-2 mice,their original generation hepatic sinus endothelial cells, immortalized human hepatic sinus endothelial cell line. These studies will provide experimental evidence for the molecular mechanism and treatment of liver fibrosis.

肝窦毛细血管化是肝纤维化的早期事件，VEGF水平升高促进肝窦毛细血管化，但VEGF上调的信号转导机制及其在肝纤维化过程中的在体意义有待进一步探讨。研究发现，肝纤维化过程中的肝窦毛细血管化与Slit2-Robo1、PI3K/AKT信号通路及VEGF表达改变密切相关。Slit2-Robo1可在细胞水平通过PI3K/AKT影响VEGF表达。因此，我们假设：Slit2-Robo1信号通路可能通过影响VEGF表达影响肝纤维化过程中的肝窦毛细血管化。本课题拟以C57BL/6小鼠、Slit-2转基因小鼠、小鼠原代肝窦内皮细胞、永生化人肝窦内皮细胞株为研究对象，用不同手段干预相关信号分子的水平，进一步探讨Slit2-Robo1信号通路在肝纤维化早期肝窦毛细血管化过程中是否起作用，探讨Slit2-Robo1信号通路是否在体影响VEGF的表达。这些研究将为解析肝纤维化的分子机制以及肝纤维化的防治提供实验依据。

肝纤维化是由多种病因导致的肝细胞及其间质成分长期不断损伤和修复过程，探明肝纤维化发生发展机制对肝纤维化的防治具有重要的现实意义。VEGF 是血管标记物，也是维持肝窦内皮细胞正常分化、增殖和血管形成所必需的，α-SMA 是肝纤维化的标记物，有研究显示：二者联合检测可更准确地预测肝纤维化程度，提示血管形成和肝纤维化密切相关。VEGF 是肝窦内皮细胞表型的重要调节因子、Slit2-Robo1 可以促进新生血管形成，Slit2-Robo1 可以活化HSC、促进肝纤维化的发生发展；肝纤维化时，间质中的肝窦会发生变化，VEGF和Robo1的高表达是否更容易导致肝纤维化发生呢？.通过C57BL/6和Slit2转基因小鼠肝纤维化模型，我们发现：.1）C57BL/6小鼠按照2ml/kg 体重腹腔注射20%的CCl4 橄榄油溶液，每周注射2 次，分别在注射0、2、4 周后，对肝脏组织进行HE染色观察肝脏组织病理形态变化、Sirius Red 染色观察肝脏胶原纤维水平、免疫组织化学法检测α-SMA的表达，结果发现：随着CCl4注射时间的延长，肝纤维化程度逐渐加重。.2）C57BL/6和Slit2转基因小鼠按照2ml/kg 体重腹腔注射20%的CCl4 橄榄油溶液，每周注射2 次，分别在注射0、4 周后，免疫组织化学法检测α-SMA、Robo1和VEGF的表达，结果发现：Slit2转基因小鼠肝脏纤维化程度更重、Robo1表达更多、VEGF表达更强，而且，Robo1和VEGF大部分在肝窦内皮细胞表达。.以上结果初步显示：Slit2-Robo1信号通路可能通过影响VEGF 表达影响肝纤维化过程中的肝窦毛细血管化。