基于谱效关系研究青阳参抗创伤后应激障碍有效活性分子群和神经作用机制

Our previous research showed that the glycosides of Cynanchum otophyllum had anti-epilepsy and antidepressant activities, and were able to enhance the membrane current in hippocampal neuron mediated by GABAA receptors, selectively upregulate the gene expression of a1, a2 subtypes of GABAA receptor in different regions of brain while downregulate or not affect the gene expression of a5 subtype, and ameliorated hyperarousol, the core symptom of posttraumatic stress disorder (PTSD). In this proposal, it was planned to investigate the anti-PTSD active constituents of C. otophyllum, with the method of spectrum-effects relationship, by analyzing the relationship of the antihyperarousol effect and constituents identified in the HPLC fingerprint spectrum by grey correlation degree analysis. The identified active constituents would be collected and the active fraction be yielded, and the mechanism of anti-PTSD based on the regulation of amygdala and the connectivity with other regions in the brain will be discussed. The results of the research will be the basement for the study on drugability of anti-PTSD of C. otophyllum.

前期研究显示青阳参总苷具有抗癫痫、抗抑郁活性，并能增强GABAA受体介导的膜电流，选择性上调大脑不同区域的GABAA受体a1，a2亚基的基因表达，对a5亚基的基因表达下调或不影响，并可以有效改善创伤后应激障碍（PTSD）大鼠核心症状高唤醒行为。本研究拟从谱-效关系分析出发，以惊反射作为测定PTSD模型大鼠高唤醒行为指标，通过测定多批次青阳参总苷的活性，在完成青阳参总苷指纹图谱共有峰结构鉴定后，以灰色关联度法确定有效活性分子群，并优化制备工艺富集有效活性分子群，得到青阳参抗PTSD活性部位，结合指纹谱图-“一测多评“法，建立活性部位质量控制模式；采用蛋白质免疫印迹法和膜片钳法分别考察有效活性部位对PTSD大鼠杏仁核活动程度及与其它脑区连接性的影响，探讨青阳参有效活性分子群中多组分抗PTSD的初步神经作用机制。研究结果将为青阳参抗PTSD新用途的成药性评价及资源利用提供依据。

采用了反相硅胶柱层析方法，将青阳参总苷分成为QYS-60，QYS-70和QYS-90三个部位，经急性毒性和药理活性筛选，确定了QYS-90为青阳参抗PTSD的有效活性部位，采用分离纯化结合高效液相色谱-质谱解析的方法，分别对三个部位的化学组成进行了归属。其中QYS-60部位富集了苯乙酮类组分，从中分离得到了3个化合物，并建立该类化合物的分析测定方法。QYS-70组分为青阳参苷元甾体酯苷组，集中了以青阳参苷元为主要甾体酯苷分子群的皂苷元，该部位具有较大的毒性，在药理评价中因为毒性过大未考虑作为活性评价。采用分离纯化结合UPLC-MS/MS的方法从该部位中归属了13个组分的结构。QYS-90部位的毒性最小，药理活性筛选显示具有抗PTSD活性，确定了QYS-90为青阳参总苷的抗PTSD的有效活性部位。从QYS-90部位中归属了24个组分的分子结构，大部分为以caudatin为苷元的C21甾体酯苷。高唤醒模型（大鼠足底电击）实验结果显示， QYS-90高剂量组明显抑制线索诱发的惊反射增强并显著抑制大鼠恐惧行为，增加大鼠活动性。表明QYS-90可能主要通过介导CeA脑区GABAAR的γ2亚型表达，增强GABA系统抑制功能，治疗强应激诱发的惊反射增强和恐惧行为，其活性成分主要为以告达亭为苷元的低极性C21甾体酯苷分子群（QYS-90）。.研究结果完成了考察青阳参作为具抗PTSD活性的目标，显示QYS-90具有进一步开展成药性研究的价值，特别时其对GABA系统抑制功能的调节，具有同时抑制恐惧行为和抑制焦虑和抑郁等症状的潜力，在开发抗PTSD药物中具有一定的优势。