干细胞niche对CD44+CD117+卵巢癌干细胞转移和耐药的调控及靶向治疗

我们早期研究发现CD44+CD117+人卵巢癌干细胞在化疗耐药和侵袭转移两方面均高于未分选卵巢癌细胞和CD44-CD117-卵巢癌细胞（P﹤0.01），但这其中机制尚不明确。已知niche是干细胞存在的微环境，肿瘤干细胞的存活、增殖和分化一样受到其相应niche 的支持与调控。本课题拟分别从缺氧、炎症-基质、免疫三个微环境角度去研究干细胞niche变化对CD44+CD117+人卵巢癌干细胞转移和耐药行为的调控，并着重检测微环境中缺氧诱导因子HIF-1α、TGF-β1、IGF-1和肿瘤相关巨噬细胞与卵巢癌干细胞中多药耐药蛋白、ATP结合转运蛋白ABCG2、转移黏附蛋白β-catenin、E-cadherin、免疫耐受基因CD200的"交叉对话"和调控机制，随后通过人卵巢癌干细胞SCID鼠原位移植瘤模型进一步探讨以靶向肿瘤干细胞异常微环境为目的的治疗策略在逆转卵巢癌干细胞转移和耐药中的作用。

肿瘤细胞微环境调控肿瘤细胞的存活、增殖和分化。我们围绕miR-200c、miR-373和miR-199a调控在缺氧、炎症-基质、免疫三个微环境下对卵巢癌细胞转移和耐药的作用，并发现HIF-1a/Nur77，STAT3、上皮间质转化EMT等转录信号调控系统起到重要调控作用。首先，我们发现在缺氧环境中HIF-1α介导耐药蛋白ABCG2和转移相关蛋白E-cadherin的上调，诱导卵巢癌细胞中孤核受体Nur77表达增加。过表达Nur77可以抑制SKOV3卵巢癌细胞增殖，使细胞周期阻滞在G1期。siRNA-HIF-1α转染细胞明显下调Nur77、ABCG2蛋白和E-cadherin蛋白表达（P<0.05）。siRNA-HIF-1α转染CD44+CD117+卵巢癌干细胞侵袭转移能力显著下降（P<0.05）。与转染空载质粒SKOV3细胞相比，稳定转染pMSCVpuro-miR-199a质粒的SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移力均降低（P＜0.000 1）。将miR-200c慢病毒载体转染卵巢癌干细胞(OCICs)，可以上调OCICs细胞中转移抑制基因E-Cadherin和作为细胞周期的负调节因子p27kip1基因表达，并抑制卵巢癌干细胞(OCICs)侵袭和转移行为；同时下调ABCG2表达，参与调控卵巢癌干细胞对顺铂和紫杉醇的耐药性。其次，我们发现在炎症-基质微环境中肿瘤相关成纤维细胞的条件培养基（CAF-CM）可提高A2780和ES2卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，显著降低顺铂诱导的细胞凋亡，并呈浓度依赖性。CAF-CM可抑制凋亡通路中关键的执行蛋白Caspase-3的活化，促进抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达，及其上游调控蛋白STAT3磷酸化水也增高。STAT3抑制剂Cryptotanshinone可以逆转CAF-CM的促进耐药作用。人网膜肿瘤相关脂肪细胞通过能量交换促进卵巢癌细胞内三羧酸循环关键代谢酶——柠檬酸合酶与琥珀酸脱氢酶B分别参与促进和抑制卵巢癌细胞转移和耐药。第三，我们发现在免疫微环境中肿瘤相关巨噬细胞共培养下，miR-373过表达可以显著性抑制OCICs 细胞增生和增殖， OCIC-miR-373转染细胞的侵袭和转移能力显著性降低（P<0.05 ）；体内实验证实OCIC-miR-373转染细胞在裸鼠腹腔内播散转移能力显著性降低，其作用机制与上皮间质转化（EMT