硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症的影响

目前认为NKT细胞分为Ⅰ型和Ⅱ型NKT细胞，它们分别识别CD1d分子递呈的脂类抗原α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer）和硫酸脑苷酯(sulfatide)并随之活化。研究表明Ⅰ型NKT细胞参与哮喘过敏性气道炎症的形成，但并不清楚Ⅱ型NKT细胞在哮喘发病中是否存在作用。课题组初步观察发现硫酸脑苷酯可以显著抑制小鼠哮喘模型气道嗜酸细胞数量和 Th2型细胞因子水平。本研究拟建立小鼠哮喘模型，进一步观察硫酸脑苷酯对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症的影响；应用免疫学和分子生物学实验技术检测硫酸脑苷酯对小鼠哮喘模型肺和脾组织中Ⅱ型NKT细胞数量和活性的影响，同时观察小鼠哮喘模型肺和脾组织中Ⅰ型NKT细胞和Th细胞亚群数量和活性的变化。初步探讨硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对Ⅰ型NKT细胞和Th细胞亚群的免疫调节效应，为寻求新的人类哮喘治疗方法提供理论依据。

本项目探讨硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞是否通过抑制Ⅰ型NKT细胞的功能，进一步防止哮喘小鼠过敏性气道炎症。为此，进行以下研究：（1） 建立哮喘小鼠模型，观察硫酸脑苷酯对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响；（2）观察硫酸脑苷酯对哮喘小鼠Ⅰ型NKT细胞和Ⅱ型NKT细胞数量和功能的影响；（3）过继转移体外激活的Ⅱ型NKT细胞对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响；（4）以缺乏Ⅰ型NKT细胞的Jα18-/-小鼠为实验动物，观察OVA是否诱导Jα18-/-小鼠产生过敏性气道炎症，并进一步观察硫酸脑苷酯对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响。结果发现：（1）硫酸脑苷酯和过继转移体外经硫酸脑苷酯激活的Ⅱ型NKT细胞能够抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症，表现为肺组织及肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞减少，尤其是嗜酸细胞；肺组织中嗜酸细胞过氧化物酶（EPO）mRNA的水平显著降低；气道粘液分泌减少；BALF中IL-4和IL-5的水平明显降低；血清中OVA特异性IgE、IgG2a的水平明显降低。（2）硫酸脑苷酯能够体内激活哮喘小鼠Ⅱ型NKT细胞，包括肺Ⅱ型NKT细胞分泌细胞因子IL-4和IFN-γ水平明显增加，以及脾细胞体外经硫酸脑苷酯刺激后分泌IL-4和IFN-γ的细胞数量增加。（3）哮喘小鼠肺单个核细胞中Ⅰ型NKT细胞数量明显增高，肺Ⅰ型NKT细胞分泌IL-4和IFN-γ水平及其细胞表面早期活化标志CD69的表达明显增高；硫酸脑苷酯能够抑制哮喘小鼠Ⅰ型NKT细胞的增殖和分泌细胞因子（IL-4和IFN-γ）的功能。（4）与野生型小鼠比较，OVA诱导Jα18-/-（缺乏Ⅰ型NKT细胞）小鼠产生的气道炎症程度明显减轻；硫酸脑苷酯可以抑制Jα18-/-哮喘小鼠过敏性气道炎症。结果提示：（1）硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞可以抑制Ⅰ型NKT细胞的功能，进一步抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症；但其对以OVA诱导的缺乏Ⅰ型NKT细胞的小鼠产生的过敏性气道炎症亦有抑制，这也提示硫酸脑苷酯活化II型NKT细胞抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症可能存在不依赖I型NKT细胞途径。（2）Ⅰ型NKT细胞参与哮喘小鼠的过敏性气道炎症的形成；但OVA亦可诱导缺乏Ⅰ型NKT细胞的小鼠产生过敏性气道炎症。. 实验按照项目资助计划书进行实施，目前已发表论文3篇，其中SCI源1篇，国内核心2篇；培养硕士和博士研究生各1名。