一次注射法研究肉鸡内源氨基酸损失量的变化规律及其调控机制

以真可消化氨基酸（TDAA）营养体系评定家禽氨基酸需要及饲料氨基酸营养价值具有更高的准确性，准确测定内源氨基酸损失量（EAAL）是建立TDAA营养体系的核心和技术难点。免疫应激是集约化肉鸡饲养中最主要的应激和饲养效率下的制约因素。本项目申请者在原国家自然科学基金支持下，建立了一次注射法，可准确检测采食实际含氮日粮时家禽的EAAL。本项目拟利用一次注射法，以肉鸡日粮氨基酸平衡度和免疫应激作为处理因素，系统研究EAAL的分泌规律，并以EAAL的构成为依据，研究上述2个因素调控EAAL主要组成成分（粘液蛋白、胰蛋白酶、肠脱落细胞）的相关基因 mRNA表达丰度的变化规律，以阐明减少EAAL的调控模型与机制，为建立TDAA营养体系、优化肉鸡免疫程序和提高饲料氨基酸利用率提供理论依据和技术思路。

本研究在较宽日粮蛋白质水平范围内系统证明了一次注射法的可靠性，并重点研究了日粮不同蛋白质含量、蛋白质来源和氨基酸（AA）平衡状态对肉鸡内源氨基酸损失量（EAAL）的影响及其机制。. 研究结果表明：（1）空腹48 h的去盲肠罗曼褐公鸡，精确强饲（25 g/kg BW）以豆粕为唯一蛋白质来源、CP水平分别为0、3%、6%、9%、12%、15%、18%和21%的8种试验日粮后，立即肌肉注射20 mg/kg BW的15N-Leu，无损收集48 h排泄物，并采集强饲24 h时的血液，分别测定血浆游离Leu、排泄物粗粘液蛋白（CM）中Leu及排泄物总Leu的15N丰度（分别表示为15NLp、15NLcm和15NLd），以排泄物CM的15N-Leu作为内源总15N-Leu的指示物，检测结果表明，各组15NLcm/15NLp的比值介于0.664~0.763（P>0.05），进一步证明在较宽日粮CP范围内一次注射法成立；（2）绝大多数AA内源损失量占总AA内源损失量的比例在不同日粮CP水平时无显著差异（P>0.05），不同CP水平段时各个AA内源损失量的相对大小的顺序基本一致，此结果表明内源AA组成模式相对稳定，即无氮日粮（NFD）时的内源氨基酸模式可作为含氮日粮时的内源氨基酸模式；（3）利用一次注射法研究发现，总AA内源损失量随日粮蛋白质含量增加而增加，呈“S”型曲线变化；（4）AA表观消化率随日粮CP水平的增加呈二次曲线变化规律，而豆粕AA真消化率不受日粮CP水平的影响，表明以AA真消化率配制日粮具有较好的可加性和准确性；（5）不同蛋白质来源（豆粕、菜粕）及AA平衡状态显著影响肉鸡肠道形态及肠上皮细胞通透性；（6）免疫应激（免疫抑制、免疫亢进）降低肉鸡生长性能，减少小肠微生物种群多样性，增加有害菌群数量（增加内源氨基酸损失量），降低肠道黏膜免疫机能，降低体液和细胞免疫应答反应，免疫应激对微生物区系的影响主要集中空肠、回肠和盲肠。. 本研究进一步优化了一次注射法测定家禽采食实际含氮日粮时的EAAL，为测定饲料氨基酸真消化率提供了方法学基础；本项目应用一次注射法系统研究了日粮蛋白质来源、日粮蛋白质水平与日粮AA平衡状态对EAAL的影响及机制，阐明减少EAAL的调控模型与机制，为提高饲料AA利用率提供理论依据和技术思路。