siRNA靶向下调14-3-3基因对房水流出通道的影响及其作用机制

青光眼是中枢神经系统疾病在眼部的表现。小梁细胞凋亡和细胞骨架改变是原发性开角型青光眼主要细胞和分子变化。研究表明14-3-3蛋白是调控细胞骨架和凋亡的重要蛋白，与神经系统疾病艾尔兹海默症发病密切相关。我们前期蛋白质组学研究首次发现人眼小梁网高表达14-3-3蛋白，地塞米松作用能引起14-3-3蛋白表达减少及亚细胞定位变化。我们推测14-3-3蛋白可能也直接调控小梁细胞凋亡和细胞骨架，在青光眼发病机制中起重要作用。本课题分别在地塞米松和H2O2诱导的小梁细胞骨架变化和凋亡模型，研究14-3-3及其下游信号通路（cofilin和ASK1）的表达变化，探讨14-3-3蛋白调控小梁细胞骨架和凋亡的机制；同时在动物体内利用RNA干扰技术下调14-3-3表达，观察14-3-3蛋白对房水引流的影响。结果有望进一步阐明青光眼发病机制，为青光眼基因治疗奠定基础。

小梁细胞在小梁网房水流出途径中扮演着最为关键的角色，小梁细胞功能和性状的改变是原发性开角型青光眼重要发病机制之一。小梁细胞的收缩和与细胞外基质的粘附等功能依赖于肌动蛋白纤维和细胞骨架的调控。小梁细胞的内质网应激与其凋亡密切相关。近年国内外文献报道，14-3-3蛋白与多种细胞骨架调控蛋白和内质网应激相关蛋白结合，参与细胞骨架重塑和内质网应激通路的调控。但其在小梁细胞的功能未见报道。本研究在执行先前的的计划要点的同时，其研究结果主要分为以下三方面：1）观察14-3-3蛋白不同亚型在小梁细胞和正常人眼小梁网组织中的表达和分布；2）通过siRNA下调小梁细胞14-3-3zeta蛋白表达量，观察正常培养状态和TGF-beta1诱导的RhoA信号通路激活时，14-3-3zeta蛋白对小梁细胞骨架形态和相关信号通路的影响；3）通过改变14-3-3zeta蛋白表达，研究该蛋白在衣霉素诱导的小梁细胞内质网应激模型中对内质网反应标记物GRP78表达的影响；旨在进一步阐明原发性开角型青光眼小梁细胞骨架变化的具体机制，为寻找可能的药物治疗靶点提供新方向。研究成果发表SCI论文 篇，3次在国内外眼科学术会议上进行交流，培养毕业博士研究生两名，在读博士研究生一名。