Chemerin诱导炎症反应致卵巢颗粒细胞自身胰岛素抵抗的机制研究

Insulin resistance (IR) is not only an important characteristics of metabolic abnormalities of polycystic ovary syndrome (PCOS) , and may be the main role in the pathological of PCOS, studies have shown that obvious insulin resistance and low-grade chronic inflammation in PCOS, inflammatory cytokines produced by interference the insulin receptor signaling pathway is the main molecular mechanisms of IR. But the mechanism how to induce inflammation in PCOS, and promote the IR has not been fully elucidated. Chemerin is not only closely related to inflammation and insulin resistance, and significantly increased in patients with PCOS. This topic proposed animal and cell models, through genetic recombination and silent technology to high/low expression chemerin, observe whether chemerin is through the induction of inflammation, and inhibit insulin receptor substrate (IRS) protein tyrosine phosphorylation, interference with insulin receptor signaling pathways, from a new perspective to interpret the molecular mechanism of IR , looking for a new research targets for PCOS.

胰岛素抵抗（IR）不仅是多囊卵巢综合征（PCOS）代谢异常的重要特征，而且可能是PCOS发生的主要病理基础和始动因素。研究表明，多囊卵巢组织中存在明显的胰岛素抵抗及低度慢性的炎症反应，所产生的炎症因子干扰胰岛素受体后信号通路是炎症导致 IR的主要分子机制。但是在多囊卵巢组织、细胞中怎样产生炎症，激活炎症信号通路，促进IR发生、发展，机制尚未完全阐明。Chemerin不仅与炎症反应及胰岛素抵抗密切相关，且在多囊卵巢患者血清中明显增高。本课题拟利用多囊卵巢胰岛素抵抗动物及细胞模型，通过基因重组及沉默技术高表达/低表达chemerin，观察chemerin是否通过诱导炎症反应，并进一步抑制胰岛素受体底物蛋白（ IRS）酪氨酸磷酸化，使得胰岛素受体后信号通路破坏，试图从一个新的视点阐释卵巢自身 IR 发生的分子机制，为寻找多囊卵巢综合征内分泌及生殖功能障碍提供新的研究靶点。

背景：多囊卵巢综合征（PCOS）是一种好发于育龄期妇女的内分泌代谢异常的疾病，以高雄激素血症、慢性无排卵和卵巢多囊样改变为特征。临床上，PCOS以多毛、月经紊乱、不孕、肥胖等作为其特征表现。研究表明，Chemerin在肥胖、胰岛素抵抗、非酒精性脂肪性肝病等代谢综合征状态下水平升高，证明Chemerin是一种与肥胖、代谢综合征相关的脂肪因子。目前，尚无文献研究Chemerin及其受体CMKLR1在PCOS中生物学功能。.内容：通过研究Chemerin在多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中的表达，探讨不同表达水平的Chemerin在人卵巢颗粒细胞（COV434）增殖能力和细胞凋亡水平的变化，以及探讨Chemerin对炎性因子的影响，并通过探讨PI3K / Akt / mTOR信号通路和MAPK信号通路，了解其对COV434细胞自噬和炎性反应的影响，从而初步阐明了Chemerin与炎症反应和胰岛素抵抗的关系，了解其对多囊卵巢综合征的病理生理发生的作用及其相关机制。.结果：（（1）在大鼠多囊卵巢综合征模型中，Chemerin的表达水平在高雄激素联合高脂饮食组的大鼠卵巢组织中有明显上调。.（2）Edu荧光显微镜检测试验提示沉默Chemerin后，卵巢颗粒细胞COV434的增殖能力减弱；过表达Chemerin后，卵巢颗粒细胞 COV434的增殖能力增强。.（3）流式细胞术提示沉默Chemerin后， 卵巢颗粒细胞COV434的凋亡水平上调；过表达Chemerin后， 卵巢颗粒细胞COV434的凋亡水平下调。.（4）Chemerin能促进炎性因子IL-6、IL-8及TNF-α的表达，降低抗炎因子IL-10的表达。.（5）COV434沉默Chemerin后，p-mTOR，Akt，ERK1/2，PI3K，MAPK的表达增高；COV434过表达Chemerin后，p-mTOR，Akt，ERK1/2，PI3K，MAPK的表达降低。COV434沉默Chemerin后，ULK-1的表达降低；COV434过表达Chemerin后，ULK-1的表达增高。.（6）COV434沉默Chemerin后，LC3-Ⅱ的表达降低；COV434过表达Chemerin后，LC3-Ⅱ的表达升高。在过表达Chemeriin后的COV434中加入Torin1或Baf-A1，LC3-Ⅱ的表达水平在加入Torin1或Baf-A1