miR128调控SET表达影响卵泡雄激素生成的分子机制研究

The upregulated expression of steroidogenic enzyme of follicle is partly participated in hyperandrogenism, and it induces to anovulatory infertility. Polycystic ovary syndrome is a just such disease of hyperandrogenism. Our previous study showed that SET increased ovarian androgen biosynthesis by regulating transcription of steroidogenic enzyme genes. And the SET protein is higher expressed in overy of PCOS than that of the fertile women. Bioinformatics predicts that miR128 is one of miRNAs which down-regulates SET expression and Our previous study showed that miR128 is lower expression in ovary of hyperandrogenism of PCOS than fertile women. Therefore, miR128 may modulation androgen biosynthesis in follicle due to its effect on SET. The following studies are designed by us: ① The changes of androgen concentration, and the expression of SET are detected in follicular cells after miR128 overexpression or silencing gene; ②As miR128 overexpression or silencing and SET overexpression or silencing in follicular cells , the changes of androgen concentration, and the expression of SET are detected ; It is to explore the molecular mechanism of androgen biosynthesis regulated by miR128 in follicle; ③The combining of SET and miR-128 is confirmed by Luciferase Reporter assay system. This study will show that the miR-128 may participate in hyperandrogenism of PCOS. And it provide a new potential target for the prevention and treatment of the hyperandrogenism in PCOS.

卵泡甾体激素生成酶表达增高可导致雄激素生成过多，继发无排卵性不孕；多囊卵巢综合征（PCOS）是卵巢性雄激素过多的代表性疾病。前期研究发现SET通过促进卵泡甾体激素生成酶的表达促进雄激素的合成，且SET在PCOS患者卵巢中表达增高。通过生物信息学预测负向调控SET基因表达的miRNA， miR128在PCOS高雄激素血症患者卵巢中表达降低，提示miR128可能为SET上游调控因子，通过调控SET表达影响卵泡雄激素生成。本研究拟：①观察miR128过表达、表达沉默后SET表达及卵泡雄激素分泌；②以miR128过表达或表达沉默的卵泡为对象,将SET基因过表达、表达沉默，观察卵泡雄激素生成，研究miR128是否通过调控SET调控雄激素生成；③采用荧光素酶报告系统，研究miR128与SET结合作用。本研究将有助于阐明PCOS雄激素过多症的调控机制，并为该疾病的防治提供新的、潜在的干预靶标。

前期研究表明，SET蛋白是卵泡雄激素生成的调控因子，可能参与PCOS高雄激素形成。本研究拟寻找卵泡中调控SET表达的microRNA，为PCOS雄激素过多症的防治提供新的、潜在的干预靶标。.生物信息学分析发现miR128，miR-125b等可能转译调控SET表达，而在PCOS雄激素过多症患者卵巢中，miR128及 miR-125b表达显著降低，初步锁定miR128及 miR-125b可能为SET上游调控microRNA。进行miR128，miR-125b对SET调控的初步研究，锁定miR-125b为SET负向调控microRNA。根据预实验结果及最新文献检索，对研究方案进行了调整，改为：miR125b调控SET表达影响卵泡雄激素生成的分子机制研究。.在本课题资助下进行以下研究： .一、miR-125b对SET表达调控及对卵泡细胞雄激素生成的调控作用。.1、小鼠卵泡中miR-125b敲减后，SET表达显著升高；细胞培养液中睾酮分泌增高；miR-125b敲减后雄激素生成酶P450c17、3βHSD升高，CYP11和STAR变化无统计学意义。提示：miR-125b调控卵泡细胞睾酮生成，可能通过SET调控雄激素生成酶作用。.2、在小鼠卵泡中，miR-125b敲减同时行SET敲减，与miR-125b敲减组相比，睾酮生成减少，与对照组无统计学意义；与miR-125b敲减组相比，雄激素生成酶P450c17、3βHSD表达减少，与对照组无统计学意义。提示：miR-125b调控卵泡细胞睾酮生成，通过促进SET表达，调控雄激素生成酶作用。.二、荧光素酶报告系统验证miR-125b与SET的结合作用。.荧光素酶报告基因实验表明，miR-125b与SET基因的3-UTR区域结合并抑制其表达；对该区域的突变消除这种抑制效应；提示：miR-125b直接转译调控SET表达。.本研究提示：在小鼠卵泡中，miR-125b通过直接转译调控SET表达调控雄激素生成酶表达，进而调控卵泡雄激素生成。结合临床PCOS雄激素过多症患者卵巢miR-125b表达显著降低，SET表达增高，提示miR-125b通过负向调控SET表达调控卵泡甾体激素生成酶，进而促进卵泡雄激素合成。miR-125b为卵泡雄激素生成的调控因子，参与了PCOS高雄激素形成， 为PCOS雄激素过多症的防治提供新的、潜在的干预靶标。