癌基因在斑马鱼肠道特异性表达的生物学效应及其分子机制

随着人们生活方式及生活环境等因素的改变，肠道肿瘤的发病率越来越高。目前由于缺乏合适的肠道肿瘤动物模型，导致对其发生的分子机制的认识难以深入以及难以针对性筛选其治疗药物。斑马鱼由于其独特的生物学特征，愈来愈成为重要的肿瘤动物模型和肿瘤药物筛选模型。. 本项目先采用hsp70-Cre/LoxP诱导系统诱导癌基因在斑马鱼肠道的过量表达，以期获得稳定遗传的转基因斑马鱼肠道肿瘤模型；采用遗传学方法研究TGF-beta信号通路对引起肠道肿瘤形成的分子发病机理；再采用抑制性差减杂交和基因芯片技术分析斑马鱼肠道肿瘤发生过程中的差异表达基因；最后采用To12转座子介导增强插入技术构建患肠道肿瘤斑马鱼的突变体,通过对肿瘤生长速度表型的筛选，寻找斑马鱼肠道肿瘤的重要癌基因或抑癌基因，并分析它们的生物学功能。本课题的实施，将进一步阐明肠道肿瘤发生的分子机理，并最终为筛选治疗肠道肿瘤有效的药物奠定基础。

由于目前缺乏合适的肠道肿瘤动物模型，导致对肠道肿瘤发生的分子机制的认识难以深入，这也严重阻碍了肠道肿瘤预防和早期诊断技术的发展以及有效治疗药物的筛选。本项目拟采用转基因技术，在斑马鱼肠道特异性诱导表达原癌基因，建立斑马鱼肠道肿瘤模型，再在此基础上分析肠道肿瘤发生的机制，为进一步阐明肠道肿瘤发生的分子机理，并最终为筛选治疗肠道肿瘤有效的药物奠定基础。. 本项目经过四年的努力实验，构建了热休克蛋白HSP70诱导Cre酶表达的转基因斑马鱼品系以及fabp2-loxP-RFP-loxP-kras和fabp2-loxP-RFP-loxP-c-Myc转基因斑马鱼品系。获得了稳定的能受热诱导表达Cre酶的斑马鱼品系，以及在肠道中稳定表达fabp2-loxP-RFP-loxP-kras和fabp2-loxP-RFP-loxP-c-Myc的斑马鱼品系。通过杂交获得了可通过热诱导在肠道中表达kras、c-jun和c-myc的斑马鱼，并观察了这些在肠道表达原癌基因斑马鱼肿瘤形成的情况。