脂联素对纤溶系统t-PA/PAI-1表达的影响及机制研究

脂联素作为国际上新近发现的血栓性疾病的一个保护性因子，对血管内皮细胞有明显的保护作用。但是目前仍无关于脂联素对纤溶系统影响方面的研究，而纤溶活性与血栓形成密切相关。本项目研究脂联素对人血管内皮细胞t-PA/PAI-1表达的影响，并探讨其可能的信号转导机制及转录调控机制。采用原代人脐静脉内皮细胞研究脂联素对TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞t-PA/PAI-1表达的影响，发色底物法检测t-PA、PAI-1 活性， westernblot及RT-PCR检测t-PA、PAI-1表达；Westernblot检测多种信号转导蛋白的磷酸化及AP-1、SP-1蛋白水平；蛋白迁移率分析（EMSA）法检测NF-κB及IκB-α结合活性；双荧光素酶报告基因技术研究PAI-1基因上游启动子AP-1及SP-1的转录调控作用。本研究可以进一步阐明血栓形成的部分机制，并能为防治血栓形成提供重要的理论依据。

本研究采用原代HUVECs研究脂联素（Adiponectin，Adp）对TNF-α诱导的HUVECs细胞t-PA、PAI-1表达的影响及其调控机制。首次发现：① TNF-α可以在蛋白与转录水平诱导HUVECs细胞表达PAI-1水平上升，并呈剂量与时间依赖关系，而TNF-α对HUVECs细胞t-PA表达水平无明显影响；② 脂联素可以在mRNA、蛋白及活性水平上明显抑制TNF-α诱导HUVECs细胞PAI-1的表达，脂联素对HUVECs细胞t-PA表达无影响；③ TNF-α可使p38MAPK 、p44/42MAPK、SAPK/JNK磷酸化水平显著增强，但是这三条信号传导途径与脂联素抑制TNF-α诱导的HUVECs细胞PAI-1表达无关；④ cAMP-PKA-AMPK依赖的信号途径以及PI3K-Akt-NF-κB依赖的信号途径在脂联素抑制TNF-α诱导的HUVECs细胞PAI-1表达起了非常重要的作用；⑤ PA-1基因启动子区域5′上游序列中AP-1、SP-1结合位点在TNF-α对PAI-1诱导反应中具有重要调控作用，脂联素可通过抑制AP-1、SP-1转录因子表达而调控抑制TNF-α诱导的PAI-1基因的表达；⑥ 脂联素可通过抑制IκB-α的降解，降低NF-κB的DNA结合活性，抑制相关基因的转录，下调其下游PAI-1 mRNA表达，调控PAI-1的合成。上述结果证实了脂联素作为一种重要的抗炎因子，具有抑制血管内皮细胞表达纤溶系统关键物质PAI-1的作用，但不影响血管内皮细胞t-PA的表达，可以调节机体内纤溶系统活性而抗血栓形成，脂联素这种抑制PAI-1表达的作用受多条信号途径的调节，可通过特异性信号转导抑制剂调节PAI-1的表达。本研究阐明了血栓形成的部分机制，并为防治血栓形成提供重要的理论依据。