左归丸“补肾-益精填髓-壮骨”调控骨耦联治疗绝经后骨质疏松症的分子机制及配伍机理研究

Based on the traditional Chinese medicine theory of “the kidney storeing the essence , nourishing the marrow and controlling bones”,this study explore the efficacy mechanism of the treatment of postmenopausal osteoporosis(PMOP) from the regulation role of brain,bone marrow in bone remodeling,by analysising interaction among Orexin,Runx2 and OPG/RANKL/RANK system with Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells(BMSCs) as the focus. We show the biological basis of Zuogui pill regulating BMSCs to intervention bone coupling for promoting bonereconstruction, and the role of brain and bone marrow In the process. We learn from the bone regulation model of dual governing with "kidney yin and kidney yang" of in The theory of traditional Chinese Medicine,and Investigate the pharmacodynamic contribution and the cooperative relations of nourishing kidney yin tonic and warm Kidney Yang tonic in effects of zuogui pill, “nourishing kidney essence and tonifying marrow to build bones”,by the factorial analysis method. study the synergistic interaction mechanism and law of compatibility of nourishing kidney yin tonic and warm Kidney Yang tonic,clarify the biological significance of combined structurethe "reinforcing yin from yang" in zuogui pill.

本研究基于中医”肾藏精，主骨生髓”理论，从脑、骨髓与骨重建的调控关联出发，以骨髓间充质干细胞(BMSCs)为着眼点, 通过中枢神经肽Orexin、骨形成关键调控因子Runx2的时空表达与骨耦联调节杠杆OPG/RANKL/RANK系统间的交互作用，探讨左归丸调控BMSCs干预骨耦联促进骨重建的生物学基础，阐释左归丸干预骨重建效应的中枢（脑）及外周（骨髓）调控关联模式，揭示左归丸”补肾-益精填髓-壮骨”效应在绝经后骨质疏松症治疗中的分子机制。借鉴中医经典“肾阴、肾阳”双重调节“阴阳平衡”的骨调控模式，采用析因分析方法阐明左归丸方中滋肾补阴药与温肾助阳药在“补肾-填精生髓-壮骨”效应机制中不同环节的药效贡献及协同关系，探讨滋肾补阴药与温肾助阳药配伍结构的协同增效机理及配伍规律，阐明 “阳中求阴”配伍模式在“补肾-益精填髓-壮骨”效应中的组方意义。

本研究通过探讨左归丸干预卵巢骨质疏松症模型大鼠骨藕联的效应及分子途径，证实左归丸能够促进去骨形成过程，抑制其骨吸收过程，从而纠正骨骨藕联失衡，具有增加骨量，改善骨小梁显微结构，增强骨的力学特征的生物效应，明确了左归丸治疗绝经后骨质疏松症的药效作用。在此基础上，我们研究发现“补肾益精壮骨”代表方左归丸干预骨藕联的效应机制具有中枢/外周双重模式。左归丸可以通过调节下调去卵巢骨质疏松症模型大鼠中枢脑组织中OX1R、β2-AR和外周骨组织中β2-AR的表达，上调其中枢脑组织Orexin-A、OX2R和外周骨组织Orexin-A、OX2R表达，从而激活OPG/RANKL系统，抑制骨吸收，促进骨形成，纠正骨藕联失衡。这与中医传统理论中“肾主骨生髓”，强调肾精亏虚-髓海（包括脑髓、骨髓）失养-骨枯萎弱的病机，并据此提出补肾壮骨治法的理论认识相一致。本研究还从细胞层面揭示骨髓中的BMSCs是左归丸“壮骨”效应的靶细胞。左归丸可以促进BMSCs的增殖，通过上调BMSCs细胞Orexin-A、OX2R、RUNX2和OPG表达，下调RANKL和OX1R表达，诱导其向成骨细胞方向分化，抑制破骨细胞活化。该作用在受到OX2R拮抗剂或OX1R/OX2R双重拮抗剂后减弱，而在OX1R拮抗剂后作用增强，说明左归丸促进BMSCs细胞增殖以及向成骨方向分化，抑制破骨细胞活化的作用是调控RUNX2介导的OPG/RNAKL信号通路来实现。而该分子途径上游受到rexin-A及其受体信号通路的调节。左归丸通过对Orexin-A及其受体信号通路的调节实现中枢（脑髓）和外周（骨髓）的双重调控，干预RUNX2介导的RNAKL/OPG信号通路，促进BMSCs细胞向成骨方向分化，促进骨形成，并抑制破骨细胞活化，减弱骨吸收实现的。而对中枢及外周β2-AR的调节，可能是其实现“补肾益精壮骨”效应的另一重要分子途径。而在本研究结果发现左归丸组方配伍结构中“补阴药”与补阳药“之间并没有表现出协同作用。这显示了左归丸“补肾益精壮骨”效应机制的复杂性、多重性、多效性，在一定程度上为全面认识左归丸“补肾益精壮骨”的药效机制，揭示中医“肾-精-髓-骨”关联理论的科学内涵和价值提供了有力的证据支持。。这将为继承和阐释中医经典理论的科学内涵提供了依据和方向。