金柴抗病毒胶囊对流感病毒感染激活的GIR—I信号通路的影响研究

Pathological reaction of virus infection disease involve in virus and host immunity.The immune cells induced type I interferon to clear virus; but the virus has also formed a variety of mechanisms to against the body's immune system,to infect the body and cause chronic infection ,The host signal pathway of RIG-I activated by the influenza virus plays an important role in immune and antiviral escape aspects. we will use Real Time RT-PCR to detect viral load expression in lung from gene knockout mouse and peritoneal macrophage，use coimmunoprecipitation to detect RIG-I, NF- κB, MAVS, IRF3, Siglec-G, SHP2, c-Cb1 activity, and use Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay to detect expression cell factor. The aim of this study is to explore the antiviral targets of jin Chai antiviral capsule , and to provide experimental basis for revealing the antiviral mechanism of Chinese herbal medicine regulating.

流感病毒感染致病涉及病毒与机体两个复杂生物系统及其二者间的相互作用。一方面，宿主免疫细胞识别病毒感染并诱导产生I型干扰素以清除病毒；另一方面，病毒亦形成多种机制逃避机体免疫系统识别和攻击，逃逸天然免疫的监控清除，从而感染机体。流感病毒激活的宿主RIG-I信号途径在机体免疫和病毒逃逸方面发挥着重要作用。本课题采用Real Time RT-PCR技术、免疫共沉淀法、ELISA技术，观察甲型流感病毒感染基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞和基因敲除小鼠肺脏中病毒载量、RIG-I、NF-κB、MAVS、IRF3、Siglec-G、SHP2、c-Cb1蛋白活性，以及细胞因子表达，从细胞、分子和基因水平阐明流感病毒感染的生物学机制，并在此基础上探讨金柴抗病毒胶囊抗病毒以及干预病毒免疫逃逸作用靶点，为揭示中药整体调节的抗病毒机理提供实验依据。

流感病毒感染致病涉及病毒与机体两个复杂生物系统及其二者间的相互作用。一方面，宿主免疫细胞表现出对病毒感染的主动限制，另一方面，病毒亦形成了多种机制逃避机体免疫系统识别和攻击，逃逸天然免疫的监控清除，从而导致宿主细胞变性、坏死、脱落，造成粘膜充血、水肿和分泌物增加，激发持续的细胞因子过表达，导致炎症反应及免疫失调，引起急性肺损伤，发展形成急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，近年来研究表明，甲型H1N1流感病毒侵入机体后，其RNA能被RIG-I 识别，从而激活其通路下游的NF-kB、IRF-3活化，调节细胞因子的表达，产生抗病毒作用；同时，流感病毒也能够抑制RIG-I活化及其触发的干扰素产生，从而帮助流感病毒逃逸机体天然免疫。课题采用RIG-I-/-组与RIG-I+/+组两种实验动物，从细胞、分子、基因水平探讨金柴抗病毒胶囊抗流感病毒、干预病毒逃逸作用，为揭示其免疫调节作用机制提供实验依据。.目的：探讨基于RIG-I信号转导通路金柴抗病毒胶囊抗流感病毒免疫调节作用，明确基于此通路金柴抗病毒胶囊抗流感病毒分子机制以及干预病毒逃逸作用。.方法：甲型H1N1流感病毒滴鼻感染小鼠，于感染第2天、第3天、第5天、第7天，随机取称重后，摘眼球取血并分离血清，解剖取肺，PBS冲洗腹腔取腹腔巨噬细胞，采用液相芯片检测技术检测细胞因子；实时荧光PCR方法检测病毒基因表达量；采用免疫印迹（Western-Blot）法检测RIG-I、NF-kB、IRF3、siglec-g蛋白活性情况。.结论：RIG-I信号转导通路在流感病毒感染后细胞因子的表达中产生重要的调控作用，金柴抗病毒胶囊能通过调节RIG-I信号转导通路蛋白活性及细胞因子释放，上调低表达，下调高表达，从而对发挥抗流感病毒作用，干预病毒免疫逃逸。.