利用斑马鱼为模型研究miR-9对单核/巨噬细胞功能及其在动脉粥样硬化形成中的影响

Atherosclerosis is a common disease that is detrimental to human health. Monocyte/macrophage function stimulated by oxLDL is essential for the origin and development of atherosclerosis. However, the mechanism involved is not clear yet. Our earlier vitro research has demonstrated that miR-9 plays a vital role in ahtrosclerosis , which functions by regulating monocyte/macrophage lipid intaking, inflammation factors secretion, migration,as well as cell apoptosis. Thus, we establish a monocyte/macrophage specific miR-9 expression zebrafish model in attempt to carry on a further vivo study. This vivo study is on purpose of verifying the role of miR-9 in monocyte/macrophage function and atheroscleroma formation. Furthermore, on the ground of earlier bioinformatics prediction and provement in vitro, RISC-Sequencing will be further applied to screen for downstream genes of mir-9, which will help to find some more crucial targets in atherosclerotic disease treatment.

动脉粥样硬化是严重危害人类健康的常见病，oxLDL激活单核/巨噬细胞生物学功能对动脉粥样硬化发生发展具有关键意义。迄今对oxLDL激活单核/巨噬细胞功能的关键内在机理仍知之甚少。我们前期研究发现，miR-9在调控oxLDL激活单核/巨噬细胞脂质摄取、炎症因子分泌、细胞迁移及凋亡等过程中起重要作用，表明其对动脉粥样硬化斑块形成发展有重要意义。因此，我们拟在前期研究基础上，通过转基因技术上调/下调miR-9表达，构建单核/巨噬细胞特异性过/低表达miR-9斑马鱼模型，体内进一步研miR-9对单核/巨噬细胞功能及动脉粥样硬化的影响。此外，在已进行体外生物信息学预测并初步验证的基础上，通过RISC-Sequencing技术进一步发现并证实其下游靶基因，以期找到调控oxLDL激活单核/巨噬细胞生物学功能的更关键靶点，为动脉粥样硬化防治提供新方向。

动脉粥样硬化是严重危害人类健康的常见病、多发病，oxLDL激活单核/巨噬细胞生物学功能对动脉粥样硬化发生发展具有关键意义。迄今对oxLDL激活单核/巨噬细胞功能的关键内在机理仍知之甚少。我们前期研究发现，miR-9在调控oxLDL激活单核/巨噬细胞脂质摄取、炎症因子分泌、细胞迁移及凋亡等过程中起重要作用，表明其对动脉粥样硬化斑块形成发展有重要意义。为了进一步证实miR-9对动脉粥样硬化的调控作用，我们在前期研究的基础上, 构建以单核/巨噬细胞特异启动子zlyz驱动、荧光标记的miR-9过表达转基因动脉粥样硬化斑马鱼模型。通过该模型，我们对miR-9是否体内调控单核巨噬细胞从而影响动脉粥样硬化的发生发展进行了探讨。通过显微镜技术我们发现miR-9明显抑制单核巨噬细胞迁移能力、高效液相色谱法证实miR-9抑制单核巨噬细胞脂质吞噬能力、ELISA法检测发现miR-9抑制炎症因子（IL-1β，TGF-β，MCP-1）释放、流式细胞仪技术发现miR-9减少细胞凋亡水平。组织切片显示，miR-9抑制斑块发生及发展。但随着斑马鱼的年龄增长，其逐渐丧失了透明性， 因而无法进一步行显微镜成像技术。为了在大体层面进一步证实miR-9对单核巨噬细胞所致动脉粥样硬化的抑制作用，我们同时构建了单核/巨噬细胞特异性miR-9过表达小鼠模型。小鼠模型的大体研究标本同样证实miR-9可以抑制动脉粥样硬化斑块形成，稳定动脉粥样硬化斑块。结合斑马鱼平台模型及小鼠模型的研究结果，充分证实了miR-9通过抑制单核巨噬细胞活性，能有效抑制动脉粥样的发生发展。我们对miR-9的作用机理也进行了探讨。结合信息预测技术，我们通过 RISC-Seuencing 技术以及萤火素酶报告技术对miR-9的下游作用靶点进行了探讨。我们发现BCLAF1及Bcl2L11（凋亡）、ABI1（迁移）、JAK1（炎症及脂质吞噬）是miR-9的靶基因。Rescue研究证实，过表达BCLAF1、Bcl2L11、ABI1、JAK1可逆转miR9对单核巨噬细胞功能的调控作用。综上，通过该研究，我们发现miR-9通过抑制单核巨噬细胞功能，延缓了动脉粥样硬化的发生发展的作用及其机理，上述研究结果为动脉粥样硬化的防治提供新的方向。