细胞膜色谱技术用于中药安全性和有效性评价的基础研究

The traditional Chinese medicine injections（TCMI）is one of widely used TCM modern preparation in clinic. Recent years, the safety and effectivity of TCMI has become a hot issue. Cell membrane chromatography (CMC) established by applicant in 1996 has been widely used. NSFC key project "High expression TKR cell membrane chromatography and its application basis research" has been evaluated as excellent one in 2011. As the concluding objective of the project above, it has been achieved to establish the method of high selectively "recognition/identification" of target components from complex samples using CMC models. Basis on those, we will try to carry out following items during the new project: to develop the high expression H1R and IgER CMC models combined with the biological activity testing for screening the constituents which can be caused type I allergies and anaphylactoid reaction from TCMI and related herbs; to screen the effective components of TCMI by high expression L-calcium channel and alpha-1A receptor CMC models and related pharmacological tests. Furthermore, TCM fingerprints including allergenic and active components will be developed using high expression receptor CMC-online-HPLC-MS/MS 2D chromatographic system and HPLC fingerprint techniques, and applying for process analysis in the TCMI manufacture. The finishing of this project will be provided novel technology and method for the safety and effectivity evaluation of TCMI.

中药注射剂是临床上广泛应用的中药制剂，其安全性和有效性问题一直是人们关注的热点。申请者创立细胞膜色谱法（CMC）已得到广泛应用，2011年国科金重点项目"高表达 TKR-CMC 模型的建立与应用基础研究"优秀结题，基本实现了CMC 法高选择性地从复杂体系中"识别/鉴定"目标组分的研究目标。在此基础上，本项目通过构建高表达H1R和IgER细胞膜色谱（CMC）模型，结合生物活性验证，对中药注射剂及相关药材中可能引起I型过敏反应和类过敏反应的致敏组分进行筛选研究；利用高表达α1A受体、L-钙通道等CMC模型，结合药理学实验，对中药注射剂中药效组分进行筛选研究；同时，利用高表达受体CMC-online-HPLC-MS/MS二维色谱分析系统，以及HPLC指纹图谱技术，研究建立分别包含致敏组分、药效组分的中药指纹图谱，并用于中药注射剂的生产过程分析，为中药注射剂安全性和有效性评价提供新技术和方法。

注射用制剂在临床上广泛应用，其安全性和有效性问题一直地是人们关注的热点。项目通过构建高表达MRGPRX2、H1R和IgER细胞膜色谱（CMC）模型，结合生物活性验证，对注射剂用制剂如，化药、中药注射剂及相关药材中可能引起I型过敏反应和类过敏反应的致敏组分进行筛选研究；利用高表达CMC模型，结合药理学实验，对中药注射剂中药效组分进行筛选研究；同时，建立HPLC/MS高分辨色谱技术，以致敏组分、药效组分为对象应用于注射用制剂的生产过程分析。项目执行期间完成了相关研究内容，发现了：1. 发现临床使用的肌肉松弛剂、镇痛药及抗生素等药物为MRGPRX2新配体，可导致肥大细胞、嗜碱性粒细胞发生脱颗粒反应继而诱发类过敏反应，该受体可以作为预测临床药物类过敏反应的生物标志物。，为安全性和有效性评价提供新技术和方法；2. 首次发现中药注射剂中引发类过敏反应的关键活性组分及其主要药效机制，并深入阐明了以MRGPRX2、H1R及IgER三类受体为靶标的类过敏反应的分子通路与机理；3. 建立了MRGPRX2、H1R及IgER三类高表达受体的“识别-鉴定”二维分析方法，以及类过敏反应的细胞水平、整体水平活性评价模型，证实引发和拮抗类过敏反应药理学基础；4. 制定了中药注射剂中5-HMF、黄芩苷、盐酸青藤碱等类过敏组分的检查方法，并上报作为《中国药典》的增补标准，加强对中药注射剂质量的控制，提高其使用安全性。