CMV特异性T细胞回输促进受者内源性抗CMV免疫重建的机制研究

Adoptive immunotherapy with human CMV-specific T cell (HCMV-CTL) is a new option for HCMV infection after allogenic stem cell transplantation (allo-SCT). However, the mechanisms that drive sustained antiviral immunity induced by adoptive T cell transfer remain undetermined. We have previously reported that adoptive transfer with HCMV-CTL can effectively promote the quantitative and functional recovery of HCMV-CTL in vivo, but the source of the recovered HCMV-CTL remains unknown. Our preliminary data showed that long-term recovery of HCMV-specific immunity may probably developed from the restoration of endogenous (graft-derived) T cells and not from the expansion of adoptively transferred cells. Based on our previous work, this study attempts to confirm the source of the in vivo recovered HCMV-CTL after adoptive therapy, and explore the important pathways for promoting the long-term recovery of antiviral immunity. The role of Wnt-β-catenin/TCF1 signaling pathway and its agonist and inhibitor in mediating HCMV-CTL reconstruction will be evaluated in vitro study, in humanized HCMV infected mice model and in clinical study. The successful implementation of this study will improve the efficacy of adoptive HCMV-CTL therapy, and may provide novel therapeutic strategies for the HCMV infection.

过继回输人巨细胞病毒特异性T细胞（HCMV-CTL）是治疗移植后HCMV感染的新策略。申请人前期研究结果表明过继回输HCMV-CTL安全有效，可促进患者体内HCMV-CTL的有效重建，但短暂的过继回输如何介导体内持久抗病毒免疫的机制不明确。本研究预实验结果提示过继回输很可能促进了内源性（移植物来源）HCMV-CTL的恢复，而非过继回输细胞的持续扩增。鉴于此，本研究拟通过体外实验、人源化小鼠实验及临床对列研究，明确HCMV-CTL过继回输后体内重建的HCMV-CTL来源，揭示介导体内HCMV-CTL重建的关键信号通路（Wnt-β-catenin/TCF1）及相关信号分子，以阐明过继回输促进体内持久抗HCMV免疫的分子机制。本研究对于进一步优化过继回输方案、提高回输疗效具有重要意义，可能为HCMV-CTL联合小分子药物治疗移植后HCMV感染提供理论依据。

过继回输人巨细胞病毒特异性T细胞（HCMV-CTL）是治疗移植后HCMV感染的新策略。申请人前期研究结果表明过继回输HCMV-CTL安全有效，可促进患者体内HCMV-CTL的有效重建，但短暂的过继回输如何介导体内持久抗病毒免疫的机制不明确。本研究：①体外实验证实HCMV-CTL对靶细胞的杀伤能力：以负载了HCMV-pp65肽段的RAJI细胞作为靶细胞，以体外扩增培养成熟的HCMV-CTL为效应细胞，证实HCMV-CTL体外对靶细胞的杀伤能力。②构建小鼠模型：通过回输HCMV AD169病毒株感染的MRC5细胞构建HCMV感染的人源化小鼠模型，以及通过腹腔注射转染了HCMV-pp65肽段的RAJI细胞构建肿瘤化的人源化小鼠模型。③阐明HCMV-CTL过继回输后体内免疫重建规律及来源：借助上述2种小鼠模型，通过过继回输荧光标记的第三方供者来源及移植供者来源HCMV-CTL，分析HCMV-CTL数量及功能重建规律，并通过分析荧光标记细胞，阐明第三方供者来源及移植供者来源的HCMV-CTL过继回输均可重建体内免疫，促进了内源性（移植物来源）HCMV-CTL的恢复，而非过继回输细胞的持续扩增；通过临床队列分析比较了第三方供者来源及移植供者来源HCMV-CTL抗HCMV感染的临床安全性及有效性，监测了回输前后体内免疫重建，并通过TCR测序分析重建的HCMV-CTL来源阐明HCMV-CTL过继回输促进的是内源性CMV特异性免疫重建。④探索了Wnt-β-catenin/TCF1信号通路在介导体内HCMV-CTL重建中的作用：借助上述2种小鼠模型，观察HCMV-CTL回输治疗后小鼠体内病毒清除情况，阐明其杀伤清除骨髓等中枢器官以及外周血中HCMV病毒的能力；分析回输后小鼠外周血、骨髓及脏器中HCMV-CTL趋化分布情况，明确回输的HCMV-CTL趋化至骨髓等中枢器官的能力；以Wnt-β-catenin/TCF1通路激动剂及抑制剂体外作用HCMV-CTL细胞，探索Wnt-β-catenin/TCF1信号通路在HCMV-CTL重建中的作用。通过大样本临床数据分析证实HCMV-CTL过继回输治疗移植后CMV感染安全有效，并分析了影响回输疗效的因素。