一个功能未知的长链非编码RNA——RNF157-AS1调控卵巢上皮癌侵袭转移的分子机制研究

RNF157-AS1, an unclear function lncRNA, was specially over-expressed in malignant epithelial ovarian carcinoma (EOC), identified from differential lncRNA expression profile in normal ovarian tissue, benign and malignant ovarian tumor tissue. Our previous study indicated that RNF157-AS1 was more highly expressed in III/IV ovarian tumor tissue, suggesting it may be related with the invasion of ovarian carcinoma. Further studies revealed overexpression of RNF157-AS1 could increase the invasion ability of EOC cells. On the other hand, bioinformatic analysis and experiment data indicated that FOXJ1 could be a candidate target gene of RNF157-AS1. Base on these data, we will further investigate the bioinformatics characteristics of RNF157-AS1. Adopting overexpression and knock down strategies, we intend to explicit the effect of RNF157-AS1 on invasion progression of ovarian carcinoma; Using FOXJ1 as a mechanism clue, we will further investigate regulatory mechanism of the interaction between RNF157-AS1 and FOXJ1. Up to now, there is no report of RNF157-AS1 in tumor. This study may provide a new target for the gene targeted therapeutics of ovarian carcinoma.

RNF157-AS1是采用芯片技术筛选恶性卵巢上皮癌、良性卵巢上皮肿瘤和正常卵巢上皮组织差异非编码RNA时获得的、显著高表达于卵巢上皮癌、功能未知的一条lncRNA。前期发现RNF157-AS1在III/IV期卵巢上皮癌表达水平更高，提示与侵袭转移相关，进一步过表达RNF157-AS1证实其可显著促进卵巢上皮癌细胞侵袭能力；生物信息学与实验发现FOXJ1可能为RNF157-AS1调控靶标。本项目拟在已有研究基础上，进一步探讨RNF157-AS1的生物学特征，采用过表达与敲低策略，明确RNF157-AS1对卵巢上皮癌细胞侵袭转移的影响；并以FOXJ1为机制主线，探讨RNF157-AS1与FOXJ1的相互作用及调控机制。有关RNF157-AS1促进卵巢上皮癌细胞侵袭的作用和机制国内外未见报道，本研究有望揭示RNF157-AS1在卵巢上皮癌中的作用与机制，为卵巢癌的防治提供新干预靶标。

卵巢上皮癌是一种常见的女性生殖道肿瘤，发病率仅次于宫颈癌和子宫体癌，但其恶性程度高，预后差，病死率高居妇科癌症首位，五年存活率不到30%。近年来lncRNA不断被证实在包括卵巢上皮癌在内的各种肿瘤的发生、发展中发挥着重要的调控作用。我们通过lncRNA芯片技术检测了卵巢上皮癌组织，良性卵巢囊肿以及正常卵巢组织中差异lncNRA谱，其中一条功能未知的且差异高表达于卵巢上皮癌组织中的lncRNA RNF157-AS1引起了我们的关注。通过qPCR技术在8例正常卵巢上皮组织、17例良性卵巢上皮囊肿以及15例恶性上皮卵巢癌组织中进行验证，结果与芯片趋势一致。我们进一步通过siRNA干扰片段和过表达质粒转染卵巢上皮癌细胞SKOV3及OVCAR3，CCK8和克隆形成实验显示RNF157-AS1干扰后显著抑制了卵巢上皮癌细胞系SKOV3及OVCAR3的增殖能力，过表达RNF157-AS1后增加了卵巢上皮癌细胞增殖。Transwell实验和划痕实验结果显示RNF157-AS1表达降低抑制了卵巢上皮癌细胞侵袭和迁移能力，RNF157-AS1过表达促进了卵巢上皮癌细胞迁移能力。进一步复习文献发现，lncRNA异常表达受到转录因子的调控，通过生物信息学发现RNF157-AS1启动子区含有SP1结合位点。我们采用干扰和过表达技术发现SP1低表达降低了RNF157-AS1的表达而SP1高表达增加了RNF157-AS1表达。除此之外，我们进一步通过核质分离和qPCR检测，我们发现RNF157-AS1主要分布于细胞核内，且与相邻基因FOXJ1表达成正相关。以上结果表明：RNF157-AS1高表达与卵巢上皮癌恶性程度密切相关，并且能够通过FOXJ1调控卵巢上皮癌的恶性行为，该研究可能为临床上卵巢上皮癌提供有力的证据，也可能成为治疗卵巢上皮癌的重要靶点。