9-溴那可丁对神经母细胞瘤Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及机制研究

Neuroblastoma (neuroblastoma, NB) is the most common childhood extracranial malignant solid tumor. Novel chemotherapeutic agents are in urgent need of improving the survival rate of NB children. Noscapine and its derivatives are recently discovered antimicrotubules reagents which have attracted much attention for its little side effect, oral available and other features. However, there has no report about the curative effect or mechanism of noscapine and its derivatives on neuroblastoma yet. We found that, in neuroblastoma, new derivatives of noscapine-EMO11 inhibit neuroblastoma cells via p53-independent pathway. In addition, EMO11 reduces the expression of β-catenin in different NB cells and this effect resumed after using PI-3K agonist EGF. This project intends to observe the activation of PI-3K signaling pathway, intracellular accumulation, nuclear translocation and downstream gene expression of the β-catenin through in vivo & in vitro experiments, so that to reveal the effect of EMO11 on neuroblastoma cell growth and apoptosis from all above aspects. Different neuroblastoma cell lines have different EMO11 sensitivity，revealing the difference molecular basis of that will be helpful in guiding EMO11 clinical application and individualized medication for neuroblastoma.

神经母细胞瘤(NB) 是儿童期最常见颅外恶性实体瘤，寻找新型化疗药物是提高NB患儿生存率的重要途径。那可丁及其衍生物是新近发现的一类抗微管化疗药物，因副作用小、可口服等特点而备受关注。在神经母细胞瘤的治疗中尚无那可丁及其衍生物疗效和机理的报道。我们发现，在神经母细胞瘤中，新型衍生物9-溴那可丁(EMO11)以非p53依赖性途径发挥抗癌作用，EMO11处理不同NB细胞系后 β-catenin蛋白均不同程度下降。而PI-3K激动剂 EGF预处理这些细胞系后，再行EMO11处理则β-catenin无明显变化。其具体机制有待进一步揭示。本课题拟通过体内和体外实验分析PI-3K信号通路活化、β-catenin胞内聚集和核转位、下游基因表达等多环节研究EMO11对NB 细胞生长及凋亡的影响。揭示不同NB细胞株对EMO11敏感性差异的分子基础，为EMO11的临床应用和个体化治疗提供重要的理论依据。

神经母细胞瘤(NB) 是儿童期最常见颅外恶性实体瘤，寻找新型化疗药物是提高NB患儿生存率的重要途径。那可丁及其衍生物是新近发现的一类抗微管化疗药物，因副作用小、可口服等特点而备受关注。在神经母细胞瘤的治疗中尚无那可丁及其衍生物疗效和机理的报道。我们发现，在神经母细胞瘤中，新型衍生物9-溴那可丁(EMO11)以非p53依赖性途径发挥抗癌作用，EMO11处理不同NB细胞系后 β-catenin蛋白均不同程度下降。而PI-3K激动剂 EGF预处理这些细胞系后，再行EMO11处理则β-catenin无明显变化。其具体机制有待进一步揭示。本课题拟通过体内和体外实验分析PI-3K信号通路活化、β-catenin胞内聚集和核转位、下游基因表达等多环节研究EMO11对NB 细胞生长及凋亡的影响。揭示不同NB细胞株对EMO11敏感性差异的分子基础，为EMO11的临床应用和个体化治疗提供重要的理论依据。.本课题从细胞和动物实验两方面验证了EMO11能够抑制MAPK1，从而抑制PI-3K/AKT信号通路，促进GSK-3β 去磷酸化（活化），从而加速β-catenin降解，并进一步下调下游靶基因（如c-myc、cylinD1和survivin 等）导致细胞生长抑制。.目前本课题已成功构建了β-catenin慢病毒载体CV-186-β-catenin以及pGL3.0-Basic-c-Myc、pGL3.0-Basic-cylinD1、pGL3.0-Basic-survivin 下游靶基因双荧光素酶载体，通过Western blot、QRT-PCR、Chip、Luciferase实验进一步验证了EMO11能够抑制MAPK1，从而抑制PI-3K/AKT信号通路，促进GSK-3β 去磷酸化（活化），从而加速β-catenin降解，并进一步下调下游靶基因（如c-myc、cylinD1和survivin 等）导致细胞生长抑制。本实验通过CV-186慢病毒载体成功感染SH-SY5Y细胞系，从而构建了皮下成瘤以及尾静脉肺转移模型，进一步验证了EMO11对神经母细胞瘤的抑制作用，为临床的化疗提供了重要的理论依据。