ASPP2基于调控TGF-β介导的上皮-间质转化参与增生性玻璃体视网膜病变的作用机制研究

Proliferative vitreoretinopathy (PVR) is a most common cause for blindness, unfortunately, there is no effective treatment for PVR because of its indistinct pathogenesis. Our previous in vitro and in vivo experiments showed that ASPP2 (apoptosis-stimulating proteins of p53) could mediate epithelial-mesenchymal transition (EMT) in RPE cells, which may be related to TGF-β and play a key role in the development of PVR. However, the specific mechanism of ASPP2 signaling transduction have not been unveiled. Therefore, our present study intends: ① to investigate the effect of ASPP2 on the alterations of EMT, TGF-β/Smad signaling pathway and TGF-β/autophagy in RPE cells and its mechanism, via using human and rat RPE cells, and investigate the impact of overexpression/inhibition of TGF-β, Smad signaling pathway or autophagy on the EMT regulated by ASPP2 in RPE cells ② to investigate the effect of intravitreal injection of RPE cells with ASPP2 overexpression/knockdown on the development of PVR in BN rats and the potential signaling pathways involved. Our study will clarify the exact molecular mechanism by which ASPP2 regulates the TGF-β/Smad and TGF-β/autophagy pathways to participate in the EMT of RPE cells and the PVR development, ultimately to find a new breakthrough in the prevention and treatment of PVR.

增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是重要的致盲性眼病，因发病机制不明而缺乏有效的治疗手段。我们前期体内体外实验发现ASPP2（p53凋亡刺激蛋白）介导RPE细胞的上皮-间质转化（EMT）在PVR发生发展中起到关键作用，且可能与TGF-β相关，但具体的信号转导机制尚不清楚。为此，本研究拟：①利用人/大鼠RPE细胞，研究过表达/抑制ASPP2对RPE细胞EMT变化、TGF-β/Smad信号通路和TGF-β/细胞自噬的影响及作用机制，以及过表达/抑制TGF-β、Smad信号通路或细胞自噬对ASPP2调控RPE细胞EMT的影响 ②利用BN大鼠研究玻璃体腔注射ASPP2过表达/敲减的RPE细胞对大鼠PVR发生发展的影响及潜在的调控通路。本研究将阐明ASPP2基于调节TGF-β/Smad和TGF-β/细胞自噬通路调控RPE细胞EMT变化参与PVR的确切分子机制，为PVR的防治研究找到新的突破口。

增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是重要的致盲性眼病，目前的治疗方式以手术为主，但是并发症较多，致盲率高，药物治疗多无效。为进一步明确PVR的发病机制以助力PVR的防治，我们开展了以下研究：利用人视网膜色素上皮细胞（RPE）细胞，研究过表达/抑制ASPP2（p53凋亡刺激蛋白） 对RPE细胞上皮-间质转化（EMT）变化、TGF-β/Smad信号通路和细胞自噬的影响及作用机制；过表达/抑制TGF-β或细胞自噬对ASPP2调控RPE细胞EMT的影响；构建PVR动物模型，利用BN/SD大鼠研究玻璃体腔注射ASPP2过表达/敲减的RPE细胞对大鼠PVR发生发展的影响及潜在的调控通路。得到了以下重要结果及关键数据：一是抑制ASPP2可促进RPE细胞发生EMT变化（上皮细胞marker减少，间充质细胞maker增加，细胞形态变化，迁移功能增加），激活TGF-β/Smad、通路和细胞自噬通路。反之，过表达ASPP2可抑制RPE细胞发生EMT变化，减少TGF-β的表达以及抑制细胞自噬的发生。二是过表达TGF-β与抑制ASPP2具有协同作用，促进RPE细胞发生EMT改变；但是抑制TGF-β并不能完全阻断ASPP2调控RPE细胞EMT的作用。抑制或促进细胞自噬对ASPP2调控RPE细胞EMT的影响不确切，需要进一步探究。三是BN/SD大鼠玻璃体腔注射ASPP2过表达/敲减的RPE细胞对PVR发生发展的具有抑制/促进的作用，PVR的OCT及HE染色、视网膜功能电生理检查及免疫组化染色均有所体现，同时明确了PVR大鼠视网膜增殖膜上RPE细胞EMT变化、ASPP2/TGF-β/Smad信号通路及细胞自噬的变化趋势。本研究初步阐明ASPP2至少部分基于调节TGF-β以及细胞自噬通路调控RPE细胞EMT变化参与PVR的分子机制，为PVR的防治研究找到新的实验证据，目前发表在眼科专业期刊SCI论文一篇。