芪术颗粒对肝纤维化形成过程中VEGF介导的PI3K/Akt及p38 MAPK信号转导通路影响的研究

应用四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型，同时给予芪术颗粒灌胃预防，并设立正常对照组、实验对照组、模型对照组，分别于造模的第3d、1w、2w、4w时间点各组取肝组织，实时荧光定量PCR方法检测血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达，Western Blot法检测VEGF受体(KDR)、PI3K/Akt、p38 MAPK通路相关蛋白，免疫组化方法观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅳ型胶原、层粘连蛋白在肝窦的表达，透射电镜对肝窦内皮细胞失窗口化进行观察，动态研究芪术颗粒对VEGF介导的PI3K/Akt及p38 MAPK信号转导通路的影响，以进一步阐释芪术颗粒抗肝纤维化的机理，为化瘀通络法治疗肝纤维化提供实验依据。

目的：基于“毒损肝络”的理论，研制出了治疗肝纤维化的有效中药--芪术颗粒。在肝纤维化过程中观察芪术颗粒对VEGF介导的PI3K/Akt及p38 MAPK信号转导通路的影响，以进一步阐释芪术颗粒抗肝纤维化的机理，为化瘀通络法治疗肝纤维化提供实验依据。.方法：Waster大鼠随机分为正常组、模型组、实验对照组和芪术颗粒组，用四氯化碳复制肝纤维化模型，造模同日即给予相应治疗，分别于造模后的第1、2、4周各组处理大鼠，取肝组织，免疫组化方法染色肝窦Ⅳ型胶原、LN、α-SMA的表达，并作半定量分析。透射电镜对肝窦窦壁结构、肝窦内皮窗孔数目、内皮下基底膜的形成进行观察。实时荧光定量PCR方法观察大鼠肝脏组织中VEGF mRNA的表达。Western blot免疫印迹法检测大鼠肝脏VEGF受体KDR、PI3K／Akt信号转导通路关键蛋白Akt两种磷酸化形式(p-Akt-1 Thr308、p-Akt Ser473)、下游底物（Bad Ser136、caspase-3）、磷酸化及总p38MAPK、磷酸化及总ATF-2蛋白的表达量。.结果： 随实验时间的延长，芪术颗粒组LN、Co-Ⅳ、α-SMA的表达均较对应时间点模型对照组显著降低，差异有统计学意义（P<0.01）。电镜观察显示，肝窦内皮细胞窗孔重现，细胞间连接新建，Disse间隙有所恢复。芪术颗粒对VEGF及其受体KDR的表达有下调作用，对总p38 MAPK、p-p38 MAPK及其下游底物的总ATF-2及p-ATF-2的表达量有下调作用，对PI3K／AKT信号传导通路下游底物p-Akt（Ser473）、 Bad（Ser136）、 Caspase3 的表达量有下调作用。.结论：芪术颗粒可通过抑制VEGF介导的p38 MAPK、PI3K／AKT信号传导通路及其相关蛋白的表达，延缓肝窦毛细血管化及肝星状细胞的活化，从而改善肝纤维化的进程。.通过本项工作，发表学术论文4篇，培养研究生3人。