lncRNA ENST00000585827在子宫内膜癌中的作用及机制研究

Recent studies have shown that lncRNAs paly important role in cancer development, but its role in endometrial carcinoma is still unclear. Our previous results showed that the expression of ENST00000585827 is up-regulated in endometrial carcinoma tissues with lncRNA/mRNA microarray analysis. lncRNA/mRNA network analysis showed that its expression is correlated with some oncogenes including E2F6/E2F7. Furthermore, we found that ENST00000585827function as an oncogene which promoted the cell growth, invasion and migration in endometrial carcinoma cell lines. We will further analyze the effect of ENST00000585827 on the development of endometrial carcinoma with functional experiments both in vitro and in vivo. Moreover, we will explore the molecular mechanism underling ENST00000585827-mediated endometrial carcinoma development by analyzing the relationship among ENST00000585827, miR-424 and E2F6/E2F7. Meantime, we will investigate the specific mechanism by which ENST00000585827 was up-regulated by using bioinformatics analysis, luciferase reporter assays, EMSA, CHIP assay etc. This study will enrich our understanding of the molecular mechanism for endometrial carcinoma development, and provide novel clues for the diagnosis and treatment of endometrial carcinoma.

研究发现lncRNA在癌症发生发展中发挥重要作用，但在子宫内膜癌中的作用还不清楚。本项目前期通过lncRNA/mRNA芯片方法筛选到lncRNA ENST00000585827在子宫内膜癌中呈高表达，且lncRNA/mRNA共表达网络分析显示其与发挥促癌作用的E2F6和E2F7等多个基因表达成正相关。功能学研究发现其可以促进子宫内膜癌细胞(HEC-1A)的增殖、侵袭和迁移。我们将进一步在细胞水平和裸鼠皮下和原位移植瘤模型中研究其对生长和转移的影响，通过检测ENST00000585827、miR-424、E2F6/E2F7之间的表达调控和功能关系阐明其在子宫内膜癌中发挥促进作用的具体机制。最后通过EMSA和CHIP等技术分析潜在转录因子对ENST00000585827的直接调控阐明其异常表达的分子机制。本研究将有助于深入理解子宫内膜癌发生的分子机制，并为子宫内膜癌的诊断和治疗提供新的线索。

课题组前期实验结果显示ENST00000585827（lncRNA-E27)）在子宫内膜癌中的表达显著高于癌旁组织，并且E2F6和E2F7的表达明显升高。且本实验室前期也已经证明E2F7，E2F6的表达受miR-424的负性调控并促进子宫内膜癌的生长，迁移和侵袭。.研究内容：.1 lncRNA ENST00000585827对子宫内膜癌细胞恶性行为的影响.2.lncRNA ENST00000585827对EMT及血管形成的影响.3.miR-424和ENST00000585827之间的靶定关系验证.(1) miR-424对ENST00000585827荧光报告载体活性的影响.(2) ENST00000585827对miR-424表达水平的影响.4.miR-424介导ENST00000585827对子宫内膜癌细胞恶性行为的调控研究（细胞水平）.5.miR-424介导ENST00000585827对EMT及血管形成的调控研究（细胞水平）.6..miR-424介导ENST00000585827对子宫内膜癌细胞恶性行为的调控研究（动物水平）.实验结果：.1.将ENST00000585827敲降后，子宫内膜癌细胞的OD值下降，细胞的增殖、侵袭和迁移能力下降；同时细胞的凋亡率升高.2.将ENST00000585827敲降后，抑制了EMT的过程和血管生成能力。.3.ENST00000585827与miR-424存在靶向结合作用，ENST00000585827敲降后，miR-424的表达量升高，E2F6/7的表达量下降。.4.MiR-424可以部分逆转ENST00000585827敲降对细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用；.5.MiR-424可以部分逆转ENST00000585827敲降对EMT的过程和血管生成能力的抑制作用。.6.MiR-424可以部分逆转ENST00000585827敲降对肿瘤生长的抑制作用，并且动物层面缓解了ENST00000585827敲降对EMT的过程和血管生成能力的抑制作用。.科学意义：.本项目阐明了ENST00000585827在子宫内膜癌中高表达的分子机制及其在子宫内膜癌瘤发生发展中的作用及作用机制，使我们深入了解了子宫内膜癌发生发展的分子机制，为临床上子宫内膜癌的诊断和治疗提供了新的理论依据。