二聚化介导的G蛋白偶联受体激酶4亚家族分子的细胞膜定位机制

G蛋白偶联受体（GPCR）属于细胞表面受体超家族,是药物研发的重要靶标。GPCR功能受到7个G蛋白偶联受体激酶（GRK）调控，定位于细胞膜是GRK磷酸化GPCR的前提条件。.本项目着重研究GRK4亚家族。我们拟在最近发现的一个影响GRK5胞膜定位的潜在同源二聚化界面的基础上，开展以下工作：（1）明确 GRK4亚族分子在细胞内的二聚化现象；（2）鉴定GRK5和GRK6二聚化作用界面中的关键基团；（3）研究二聚化对GRK4亚族分子的胞膜定位及功能的影响- - 进而验证"二聚化介导的GRK4亚族分子的胞膜定位模型"假说。.本项目研究将首次揭示GRK的细胞内二聚化现象及其意义，为深入研究GRK的亚细胞分布和GPCR信号转导的调控机制、寻找新的GPCR信号通路干预靶点提供新理论和新线索。

G 蛋白偶联受体（GPCR）属于细胞表面受体超家族,是药物研发的重要靶标。GPCR 功能受到7 个G蛋白偶联受体激酶（GRK）调控，定位于细胞膜是GRK 磷酸化GPCR 的前提条件。本项目着重研究GRK4 亚家族。我们拟在最近发现的一个影响 GRK5 胞膜定位的潜在同源二聚化界面的基础上，开展了以下工作：（1）从细胞水平直接观察（BiFC及竞争性BiFC、FRET等技术）和体外生化实验（Co-IP、细胞组分分析等）二个层面确证了细胞内GRK5和GRK6分子二聚化现象。（2）结合点突变、亮氨酸拉链、BiFC和FRET等技术确定GRK5分子Met165-Phe166和GRK6分子Met165-Tyr166-Phe527等位点的疏水基团在GRK分子二聚化中起关键作用。（3）发现胞膜蛋白GRK5和GRK6分子的胞膜定位受其二聚化作用的直接影响。（4）检测了GRK5同源二聚化作用调控GPCR底物受体（PAR-1）的信号转导功能。.本项目研究首次揭示了GRK 的细胞内二聚化现象及其意义，为深入研究GRK 的亚细胞分布和GPCR 信号转导的调控机制、寻找新的GPCR 信号通路干预靶点提供了新理论和新线索。