Cbx7调控Hippo信号通路影响脑恶性胶质瘤侵袭、迁移过程的机制研究

Hippo pathway is a newly discovered protein kinase pathway that regulates the invasion and migration of cells. The imbalance of Hippo pathway is closely related to the malignant progression of tumor, but its upstream regulatory mechanism is lack of research. Although Cbx7 has been shown to inhibit tumor progression in a variety of human tumors, the exact mechanism is unclear. Based on our preliminary finding that Cbx7 can inhibit the invasion and migration of glioma cells and activate the Hippo pathway, the aim of this project is to study the effect of Cbx7 on the regulation of cell invasion and migration, including glioma specimens, cultured cells and nude mice. Cbx7 regulates the level and activity of key proteins in the Hippo pathway, and clarifies the exact mechanism that Cbx7 regulates glioma invasion and migration through the Hippo pathway. It is expected to reveal that Cbx7-Hippo pathway is a new signaling pathway regulating glioma progression and Cbx7 is the upstream regulator of human Hippo pathway, which will provide a new theoretical basis for molecular targeted therapy of glioma .

Hippo 通路是新发现的可调节细胞侵袭/迁移的蛋白激酶通路，其失调与肿瘤的恶性进展密切相关，但其上游调控机制缺乏研究。虽然Cbx7在人类多种肿瘤被发现具有抑制肿瘤进展的作用，但目前其具体机制尚未阐明。基于我们初步发现Cbx7有抑制脑胶质瘤细胞侵袭/迁移及激活 Hippo 通路的作用，本项目拟以脑胶质瘤标本，培养的细胞及裸鼠为研究对象，以调节细胞侵袭/迁移的 Hippo 通路为切入点，从分子、细胞与整体水平研究Cbx7对脑胶质瘤细胞进展（侵袭/迁移）的影响；Cbx7对 Hippo 通路关键蛋白的水平与活性的调节；阐明Cbx7 通过 Hippo 通路调控脑胶质瘤侵袭/迁移的机制。预期研究结果将揭示Cbx7-Hippo 通路是调控脑胶质瘤进展的新的信号通路，Cbx7 是人类 Hippo 通路的上游调节子，为脑胶质瘤的分子靶向治疗提供新的理论依据与治疗靶点。

摘要.目的：研究CBX7对人脑胶质瘤细胞生长的影响,同时研究CBX7通过Hippo信号通路对胶质瘤生长的作用机制。.方法：利用慢病毒转染系统在人脑胶质瘤细胞株中过表达CBX7，通过胶质瘤细胞系，胶质瘤标本以及裸鼠研究CBX7对胶质瘤细胞的生长（增殖、凋亡、侵袭、迁移）的调节作用。同时在分子水平验证CBX7蛋白通过Hippo信号通路调控胶质瘤的生长。.结果：在成功构建CBX7过表达病毒后，分别转染U87、U251和CHG-5三款细胞。比较U251和CHG-5细胞中CBX7的相对表达量后，选择U251和CHG-5做为研究对象。细胞侵袭和迁移实验表明过表达CBX7基因能抑制癌细胞U251和CHG-5的侵袭和迁移能力。荧光定量PCR检测表明，在U251细胞中过表达CBX7后，其E-cadherin基因转录上调，N-cadherin和空白组比较无显著性差异。在CHG-5细胞中过表达CBX7后，其E-cadherin和N-cadherin显著下调。WB检测结果表明在U251细胞中过表达CBX7后，其E-cadherin表达上调，N-cadherin表达显著下调。在CHG-5细胞中过表达CBX7后，其E-cadherin和N-cadherin表达均上调。二者在U251中存在一致性，但在CHG-5中呈现相反趋势。细胞周期分析检测结果表明CBX7能降低U251和CHG-5细胞的G1期比例，而对细胞S期有明显的阻滞效应。免疫共沉淀实验证明Mst1、Mst2和Lats1/2均能与CBX7发生互作。在胶质瘤细胞系，CBX7在U251和CHG-5中过表达效率良好。相比于空载过表达组，在过表达CBX7的U251细胞中CTGF mRNA表达显著上升。相比于空载过表达组，在过表达CBX7的U251和CHG-5细胞中CTGF 蛋白质表达下降，p-Lats1/2和p-Mst1/2的蛋白质表达上升。在胶质瘤标本中，CBX7蛋白质在脑胶质瘤癌组织中表达大幅低于癌旁组织。在裸鼠体内，相比于空载细胞组，过表达CBX7细胞组中CBX7、Lats1/2和E-cadherin的蛋白质表达显著上升，而N-cadherin的蛋白质表达显著下降。.结论：过表达CBX7可通过促进Hippo信号通路进而抑制胶质瘤细胞的生长。