反常性痤疮发病机制中雄激素对γ-分泌酶沉默的皮脂腺细胞影响的研究

γ-分泌酶是一种重要的细胞膜蛋白酶，其基因突变与反常性痤疮发病相关。我国反常性痤疮患者以男性为主且在青春期起病，提示雄激素可能对γ-分泌酶改变的皮脂腺细胞产生影响。为了研究该问题，我们拟采用RNA干扰的方法沉默体外培养的人皮脂腺细胞SZ95中γ-分泌酶，用含有雄激素的培养基培养细胞，并进行如下试验：（1）通过细胞免疫组化、四甲基偶氮唑盐法（MTT）、流式细胞仪和细胞荧光染色检测细胞形态、表面标志物、脂质合成和生长情况；用RT-PCR和Western Blot检测雄激素受体表达；（2）通过ELISA和Western Blot分别检测细胞上清中β-淀粉样蛋白肽40和42、细胞内蛋白C99和C83的含量；（3）通过RT-PCR和ELISA检测与雄激素代谢相关的3β-羟固醇脱氢酶、17β-羟固醇脱氢酶和5α-还原酶I的表达和活性变化。通过上述研究，可获得原创性成果，进一步揭示反常性痤疮的发病机制。

在过去的三年中，我们围绕γ-分泌酶的突变，结合临床工作和实验条件进行了如下相关研究：（1）继续调查了中国反常性痤疮家系中γ-分泌酶的突变，新发现了7个新的突变位点，出现在Nicastrin和早老素增强子亚基的基因突变数分别为6个和1个；（2）检测了反常性痤疮患者血清中的7种细胞因子，发现TNF-α、IL-6升高明显，IL-2、-4、-10轻度升高，未检测到INF-γ和IL-17；（3）研究了γ-分泌酶突变对角质形成细胞产生炎症因子的影响，在mRNA水平TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-10、S100A8和S100A9升高，TNF-β、IL-1β、IL-37降低，STAT3未改变，IL-22未检出，在细胞上清中TNF-α和IL-6升高，IL-1β降低。通过上述研究，为探讨γ-分泌酶基因突变后，HaCaT细胞中上述细胞因子产生和发挥作用的机制奠定了基础。