EB病毒感染鼻黏膜上皮细胞诱导的HMGB1对变应性鼻炎相关炎性介质的影响

Recent studies have shown that high mobility group box protein 1 (HMGB1) released of nasal mucosa can promote eosinophil survival and the release of inflammatory mediators and then increase the intensity of allergic rhinitis. In this study, based on EB virus infection rate in adults (86-95%), and our previous work that HMGB1 expression induced by EB virus characteristic gene (LMP1) in nasopharyngeal carcinoma cells, three aspects planed to be carried out that① investigates EB virus infection rates in patients with allergic rhinitis, and detects the level of transcription and translation of LMP1 / HMGB1 expression; ②analysis of cell signaling pathways of HMGB1 / p38MAPK, HMGB1 / ERK1,2 in nasal epithelial cells transfected by LMP1 recombinant plasmid and its downstream mediators such as TSLP expression relevant to Th2 response; ③ evaluates the impact of intranasal LMP1 plasmid on HMGB1 and nasal allergies in animal model. This research will benefit for us to understand if EB virus and its LMP1 protein can induced HMGB1 released by the nasal epithelial cells and then regulate nasal allergy.

最近研究发现，鼻黏膜局部释放的高迁移率族蛋白1 （HMGB1）可以促进嗜酸性粒细胞的存活及炎性介质的释放，增加鼻变态反应的强度,是变态反应的发展的重要环节。本研究基于EB病毒在成人的高感染率（86-95%），及我课题组前期工作证实的EB病毒特征基因潜伏膜蛋白1（LMP1）诱导鼻咽癌细胞HMGB1高表达，拟通过①检测变应性鼻炎患者EB病毒的感染率，并在转录及翻译水平检测LMP1/HMGB1的表达，分析其相关性；②LMP1重组质粒转染鼻黏膜上皮细胞，分析可能的细胞信号传导通路HMGB1/p38MAPK,HMGB1/ERK1,2，及其对下游炎症介质如TSLP等表达的相关性，从而明晰其对Th2方向变态反应的影响；③动物模型评价LMP1质粒鼻内干预对HMGB1及鼻变态反应的影响。为认识EB病毒LMP1蛋白及其刺激鼻黏膜上皮细胞释放的HMGB1对鼻变态反应的作用，并为通过HMGB1干预调节奠定基础。

第一部分：在变应性鼻炎（AR）患者中观察到鼻黏膜组织分泌物中HMGB1的高表达，此外，同时患有鼻咽癌及变应性鼻炎史患者与健康对照、仅患鼻咽癌者比较，鼻腔黏膜组织分泌中的HMGB1明显上调。此外，通过对鼻咽癌细胞株HMGB1进行基因敲除发现，其能下调Ku70与DNA结合的效率。.第二部分：HMGB1是重要的炎症介质启动子，是变应性鼻炎（AR）患者的鼻腔分泌物较为特异性的一个信号。本部分研究主要是研究AR患者中HMGB1及其受体Toll样受体（TLR）4与促炎性白介素的相关性。研究用酶联免疫吸附试验（ELISA）对125例AR患者或87例正常人的鼻灌洗液中的白介素（IL）-4，IL-5，IL-13，IL-17A，IL-10进行了检测，并设置对照。使用实时定量PCR（RT-qPCR）方法检查了这些受试者中HMGB1，RAGE和TLR 2、3和4的mRNA水平。采用Spearman等级相关性分析临床特征和实验室检查的生物标志物这两个因素之间的相关性。结果发现与对照组相比，AR患者的鼻灌洗液样本中IL-4，IL-5，IL-13和IL-17A显著升高，而IL-10显着降低。在这些AR患者的鼻腔分泌物中观察到HMGB1，TLR2和TLR4的高表达，而TLR3和RAGE的mRNA水平没有显着差异。此外，HMGB1 / TLR4 mRNA水平与IL-4，IL-5，IL-13和IL-17A正相关，而与IL-10负相关。 HMGB1 / TLR4的线性回归还与IL-4，IL-5（仅适用于TLR4），IL-13或-17A呈正相关，与IL-10呈负相关。AR患者鼻黏膜灌洗液样品中HMGB1和TLR4的mRNA水平较高，与IL-4，IL-5，IL-13或IL-17A呈正相关，而与IL-10呈负相关。 第三部分：探讨LMP-1重组质粒脂质体滴鼻对于变应性鼻炎动物模型鼻黏膜组织RAGE，HMGB1及TSLP表达的影响。实验将将40只BALB/c鼠分随机为两组，即AR模型组及质粒组。免疫印迹结果显示，与AR模型组比较，LMP-1重组质粒组小鼠鼻黏膜组织RAGE，HMGB1高表达，免疫组织化学结果显示IL-5，IL-13高表达，结果具有统计学意义(P≤0.05)。免疫印迹结果进一步显示质粒组鼠模型鼻黏膜组织中TSLP的高表达，与AR模型组对照比较结果具有统计学意义.