基于VEGF靶点的丹红化瘀口服液防治糖尿病视网膜病变的作用机制研究

Diabetic retinopathy (DR) is a common complication of diabetic mellitus and one of the most frequent causes of blindness in the world. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a potent angiogenic factor playing a crucial role in angiogenesis and vascular hypermeability. Our previous studies showed that Danhong Huayu Koufye (DHK) alone had significant effect on DR. The comnbination of DHK with insulin not only produced more remarkable effect on DR, but also ameliorated tolerance of insulin. The mechanical studies showed that DHK significantly protected blood vessel, inhibited retinal neovascularization and retinal edema, and reduced proliferation of endothelial cells of thoracic aorta. Many technologies such as RT-PCR and immunohistology will be applied to study the mechanisms of DHK on DR in STZ-induced type 1 diabetic rats, spontaneous type 2 diabetic rats and HUVECs. The effect of DHK on VEGF and related molecules will be studied from several levels such as animals, cells and molecules. The mechanism study of DHK based on VEGF will provide theoretical and technical support for DHK clinical usage on DR.

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病最常见的微血管病变，也是导致失明的最主要原因。VEGF是DR最重要的促视网膜新生血管生成和血管通透性增大的分子。前期基础研究发现中成药丹红化瘀口服液单用能显著防治DR；联合胰岛素使用，则不仅能更显著防治DR还能减轻胰岛素长期用药所产生的耐受性。其作用机制是多靶点多通路的，其中丹红化瘀口服液对血管的保护作用非常明显，特别是能显著抑制视网膜新生血管生成和视网膜水肿及胸主动脉内皮细胞增生。 本项目拟围绕VEGF，采用STZ诱导Ⅰ型糖尿病大鼠和自发性Ⅱ型ZDF大鼠的动物模型，及HUVEC细胞模型，结合RT-PCR、免疫组织化学等技术方法，体内外结合，从整体、细胞、分子等多水平综合评价丹红化瘀口服液对VEGF及VEGF上下游相关指标的影响，阐明丹红化瘀口服液防治DR的作用机制和作用靶点，为其增加防治DR适应症提供理论支持和技术支持。

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病常见和严重的微血管并发症，目前尚无有效早期防治药物。丹红化瘀口服液（DHK）具有防治I型糖尿病大鼠DR的作用。本项目深入探讨DHK防治DR的作用机制和靶点。.通过视功能和组织病理评价DHK防治II型糖尿病ZDF大鼠DR的作用；从VEGF靶点通路和氧化应激（OS）方面阐明DHK防治I、II型糖尿病大鼠DR的作用机制；以VEGF为靶点，结合OS阐明DHK含药血清保护高糖或缺氧诱导的内皮细胞损伤的作用；明确DHK对新西兰兔的抗凝血作用，抗大鼠动-静脉旁路、颈动脉和下腔静脉血栓形成的作用及机制。.结果发现，DHK联合二甲双胍显著改善ZDF大鼠视网膜功能降低和病理损伤。DHK显著降低STZ诱导的Ⅰ型大鼠血液VEGF、ICAM-1、vWF和NO水平，提高SOD和GPx活性，降低血小板聚集率，下调视网膜VEGF、iNOS蛋白和ICAM-1 mRNA表达，降低视网膜通透性。DHK明显降低ZDF大鼠血液ICAM-1、vWF和MDA水平，降低TG、LDL-c和全血粘度，降低血小板聚集率，下调视网膜HIF-1α、ICAM-1蛋白表达。DHK含药血清显著提高高糖/缺氧诱导的细胞增殖率和迁移率，抑制管腔形成，升高GPx活力和NO水平，明显降低ROS、MDA和ICAM-1水平，下调ICAM-1、NF-κB、HIF-1α、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、iNOS、VE-cadherin蛋白和mRNA的过表达。DHK显著延长新西兰兔凝血时间，降低大鼠下腔静脉、动-静脉旁路和动脉血栓形成率，减小下腔静脉壁的厚度及增加血栓机化再通率，减少WBC、TNF-α和CRP水平，显著升高RBC、PT和APTT。.结果表明，DHK能防治糖尿病大鼠DR，其作用机制与抗VEGF、保护内皮细胞损伤、减少OS和炎症、抗凝抗血栓形成有关。这将为DHK增加防治DR适应症提供理论依据，利于其二次开发。