脂质过载通过PKCδ/Sec61/ERAD障碍触发ERS在NASH发生中的作用

"二次打击"学说是非酒精性单纯性脂肪肝（NAFL）进展为脂肪性肝炎（NASH）的经典学说。以脂质过载为基础的"一次打击"是如何过渡到以内质网应激（ERS）为主要表现的"二次打击"，引起NASH发生，该机制尚不明确。我们既往研究表明，脂质过载时蛋白激酶Cδ（PKCδ）明显上调，并引起ERS的持续存在；而控制ERS的重要环节- - 内质网相关降解（ERAD）过程的关键蛋白Sec61(内质网转运通道蛋白)的表达却明显下调。因此我们假设，PKCδ可能通过磷酸化Sec61改变其活性，导致ERAD障碍及ERS，发生NASH。本研究将通过细胞及在体模型对PKCδ进行基因敲除，研究PKCδ对下游蛋白Sec61的调控，观察其对ERAD效应的影响，及是否由此通过ERS导致NASH的发生。从而验证PKCδ/Sec61/ERAD障碍是"一次打击"和"二次打击"连接点的新学说，为阻止NAFL向NASH的演进提供新思路。

内质网应激（ERS）在NASH肝细胞损伤中发挥重要作用，是目前的研究热点，但机制不明。Sec61 蛋白是内质网上重要的通道蛋白，也是未折叠蛋白转运及后续的未折叠蛋白降解途径(ERAD) 的核心结构，对ERS 的平衡，维持ER复杂功能起着重要作用。PKCδ是新型PKC( novel PKC, nPKC)家族成员，主要在肝脏组织中发挥作用，其表达的激活可能是诱导ERS持续发生导致肝细胞脂肪变进展至NASH发生的关键环节，但目前尚无PKCδ与ERS之间关系的研究。本研究采用体外模型和细胞培养技术，应用实时 RT-PCR、Western blot、激光共聚焦显微镜等方法，结合诱导手段、 RNA 干扰技术以及胞浆Ca2+和内质网Ca2+的释放等技术对 ERS 致 NAFLD 发生机制进行多层次研究，发现提示在肝细胞脂肪变性过程中，Sec61α 通过调节内质网GRP78 蛋白介导ERS 系列反应，参与肝细胞脂肪变的发生发展；而降低PKCδ表达能够有效抑制混合脂肪酸诱导ERS标志蛋白Bip和XBP-1s的表达，并减轻肝细胞脂肪变性，其内在的机制则与PKCδ表达抑制后对SERCA活性及钙稳态的调节有关。本研究初步阐明了肝细胞脂肪变通过激活PKCδ以及Sec61α,导致SERCA活性下降以及钙失衡，并介导内质网应激的持续存在，参与了NAFLD疾病进展和NASH的发生，为NAFLD的防治提供了新思路。