从谷氨酸-γ氨基丁酸代谢通路探讨经前期综合征肝气逆、郁两证发病机制

经前期综合征（PMS）是由性激素导致的排卵后女性心理和生理障碍的一系列症状, 前期研究发现γ-氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（Glu）在PMS肝气逆证模型大鼠血清及不同脑区中有异常，据报道性激素对中枢调节主要集中在抑制和兴奋性神经递质GABA和Glu上,Glu和GABA含量的变化受谷氨酸脱羧酶（GAD） 和γ-氨基丁酸转氨酶（GABA-T） 调控，GABA转运体（GAT）参与介导GABA的摄取和灭活。据此推测Glu-GABA代谢通路中上述关键酶活性及功能变化在两证发病机制中起重要作用。因此本项目拟采用前期研制PMS肝气逆郁两证大鼠模型，检测其不同脑区Glu-GABA代谢通路中神经递质动态变化及关键酶的活性及功能，并通过定点微量注射酶抑制剂，进一步证实该通路中关键酶在PMS肝气逆郁两证发病机制中的作用，从而揭示PMS肝气逆郁两证与该通路的关系，丰富对PMS肝逆郁两证机制的阐释。

本课题采用微透析技术、RT-PCR、Western-blot、HPLC等技术对PMS肝气逆郁两证大鼠中枢不同脑区的相关指标进行检测。结果表明：.1、采用情志刺激为主的束缚造模法可成功制备PMS肝气郁证模型大鼠。采用微透析技术及HPLC-FLD检测所采集的样品中GABA和Glu的含量。发现各组大鼠海马内Glu和GABA水平在同一动情周期的不同取样时间点均有不同幅度的波动，无明显规律性，而不同动情周期间比较呈现一定的规律性。在NR2期，模型组大鼠海马Glu/GABA比值较空白组明显降低，舒郁胶囊组、氟西汀组及抑制剂组大鼠海马Glu/GABA比值均明显高于模型组。说明Glu及GABA含量单独的改变不足以全面阐释两者在PMS肝气郁证发病中的作用及药物干预的机制，造模后各组大鼠Glu/GABA比值之间的比较对揭示该病证发病机制及药物作用机制更有意义。. 2、以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆证大鼠模型，药物白香丹胶囊干预。采用HPLC-FLD检测测定GABA与Glu的含量。发现大鼠造模后血清中GABA及Glu含量与正常组相比，均显著降低，下丘脑中GABA及Glu含量与正常组相比显著降低；顶区皮层中两种氨基酸含量均极显著降低；额叶皮层中两种氨基酸均升高；海马中两者含量显著升高。血清及四个脑区中GABA、Glu含量变化可能是导致PMS肝气逆证的重要病因之一。. 3、RT-PCR、Western-blot研究结果显示PMS肝气逆证模型大鼠海马、额叶、下丘脑中GAD65、GAD67的mRNA及蛋白水平表达均降低，而GABA-T、GAT-1都显著升高。而PMS肝气郁证模型大鼠左海马、额叶、下丘脑中GAD65、GAD67的mRNA及蛋白水平表达均升高，而GABA-T、GAT-1都显著降低；但是右海马GAD65、GAD67的mRNA及蛋白水平表达均降低。在PMS肝气逆、郁两证病证结合大鼠模型不同脑区中的表达截然相反，这为PMS 肝气逆郁临床分型研究提供有力的实验证据。.综上所述，本研究发现PMS肝气逆、郁证模型大鼠中枢不同脑区GAD65、GAD67的降低（升高）而减少（增加）了Glu转化为GABA的量，同时由于GABA-T、GAT-1的升高（降低）而增加（减少）了Glu生成。可见这三个关键酶共同调节Glu及GABA含量变化是PMS肝气逆、郁证的重要发病机制。