苦参乌梅汤抗HBV及促进感染HBV细胞凋亡的分子作用机制研究

Because hepatitis B virus (HBV) infection has become the trend of global hazard，Anti-HBV treatment needs urgent attention. Preliminary studies found that Kuhseng-Mume Decoction can significantly affect the expression of HBsAg in serum of HBV transgenic mice. But the anti-HBV effect mechanism of Kuhseng-Mume Decoction is unclear, which researches have rarely been reported. We will carry out the anti-HBV molecular mechanism studies in vitro with Kuhseng-Mume Decoction as an experimental drug, and HepG2.2.15 cells as an experimental model. We would intend to explore the secretion of proinflammatory ytokine and chemokine after stimulating the cells with drugs and the influence of HBV DNA polymerase activity, and determinate the JAK-STAT signal transduction pathway as well as related receptor with signal transduction gene chip technology. On this basis, we are using RNA interference,to verify its related signal transduction pathways and relevant mechanism of action.

乙型肝炎病毒（HBV）感染已经成为全球性危害的态势，抗乙肝病毒治疗亟待重视。苦参乌梅汤为我院长期临床治疗慢性乙型肝炎的经验方，前期研究工作发现苦参乌梅汤能够显著影响HBV转基因小鼠血清中HBsAg的表达。在HBV转基因小鼠体内具有抗HBV活性。目前对苦参乌梅汤抗HBV作用机制尚不清楚，相关研究报道甚少。本项目以苦参乌梅汤作为实验药物，以HepG2.2.15细胞作为实验模型，拟探索药物刺激细胞后诱导促炎性细胞因子和趋化因子分泌的特点及对HBV DNA多聚酶活性的影响；采用信号传导基因芯片技术测定上调细胞功能所依赖的JAK-STAT信号转导通路，以及相关受体；在此基础上采用RNA干扰技术验证其相关信号转导途径和相关作用机制，通过以上方面探讨其抗HBV的作用分子机理。

苦参乌梅汤能够显著抑制HepG2.2.15细胞上清液中HBeAg、HBsAg的分泌和HBV DNA的复制，本项目就苦参乌梅汤体外抗HBV作用机制进行了相关研究。首先从苦参乌梅汤干预HepG2.2.15细胞后，白细胞介素因子（IL-2、IL-6）、干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、核转录因子（NF-κB）及趋化因子（CCL20）等细胞因子表达量变化的角度，探讨了苦参乌梅汤体外抗HBV的作用机理，结果提示苦参乌梅汤可能通过控制免疫炎性因子活动程度，抑制免疫炎症反应，低剂量时以调节免疫为主，高剂量时以抗病毒为主；其次，通过JAK-STAT信号转导通路部分信号相关因子（STAT1、STAT2、STAT5、ISGF3、OAS、PKR mRNA）表达量变化及诱导产生的2'5'-OAS抗病毒蛋白的情况，探讨了苦参乌梅汤体外抗HBV的作用机理，结果提示苦参乌梅汤可能通过抑制JAK-STAT信号转导通路中的重要蛋白激酶的活化，阻断其信号通路向下游的信号传递，进而发挥体外抗HBV作用。综上，本项目进一步明确了苦参乌梅汤体外抗HBV作用，为进一步探寻调节免疫和直接抗病毒成分奠定了基础。