肝细胞SATB1调控巨噬细胞浸润促进自身免疫性肝炎的作用及机制研究

Autoimmune hepatitis is a chronic inflammatory liver disease caused by antoimmune reaction, but the pathogenesis is not fully elucidated. The interaction between hepatocyte and immune cell is a new approach for AIH. SATB1 plays an important role in T cell development, immune tolerance, however its role in AIH is unclear. Our previous researches demonstrated that hepatic SATB1 was upregulated in autoimmune hepatitis. Further in vivo studies, we confirmed that overexpression of SATB1 in liver could aggravate hepatocytes necrosis, infiltration of macrophage and fibrosis. In vitro levels, hepatic SATB1 upregulated the levels of CCL2. So we speculate that enhanced expression of SATB1 in hepatocytes could recruit macrophages through CCL2 and promote the production of proinflammatory cytokines with M1 phenotype, resulting in more severe inflammation in AIH. In all, we aimed at investigating the relationship between SATB1 and pathological characteristics in AIH by clinical samples, clarifying the role and molecular mechanism of hepatic SATB1 in the regulation of hepatic inflammation, and demonstrating the function of hepatic SATB1 on proinflammatory effect in vivo, which will benefit for exploring the potential intervention targets of AIH.

自身免疫性肝炎（AIH）是自身免疫反应所致慢性肝脏炎症，发病机制未完全阐明，肝细胞与炎症细胞相互作用是新的研究方向。核基质结合蛋白SATB1在T细胞发育、免疫耐受等起重要作用，在AIH发病机制中尚无研究。本项目预实验结果显示，AIH肝组织SATB1阳性肝细胞数增多。动物实验显示高表达SATB1加重肝细胞坏死及炎症细胞浸润，巨噬细胞比例增加，纤维化程度加重。高表达SATB1后培养肝细胞分泌CCL2趋化因子明显增加。我们推测AIH时肝细胞SATB1表达增加，通过分泌CCL2趋化因子，招募巨噬细胞，表达促炎因子，促进炎症反应。本项目拟通过检测临床样本验证SATB1与AIH病理特征相关；研究高表达SATB1肝细胞通过CCL2-CCR2通路趋化巨噬细胞及其分子机制；动物体内验证高表达SATB1肝细胞通过招募巨噬细胞发挥促炎效应。探讨SATB1在AIH发生中意义，为寻找新的潜在干预靶点提供实验依据。

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）是一种免疫介导的慢性肝脏损伤性疾病，其发病机制尚不明确。目前SATB1的相关研究聚焦于其在T细胞发育、免疫耐受等方面中的作用，而关于SATB1在AIH中的作用研究尚处于空白。本研究旨在以肝细胞为切入点，探讨肝细胞SATB1在AIH发展中的意义。本项目中，我们通过收集GEO生信数据库与临床患者标本，明确了肝细胞SATB1的异常高表达与AIH疾病相关。随后，我们分别构建了刀豆蛋白A（ConA）诱导的急性免疫介导的肝损伤与Ad-pCYP2D6诱导的慢性自身免疫性肝炎小鼠模型，并通过高压尾静脉注射质粒实现肝脏过表达SATB1。生化检测、肝脏切片HE染色等结果显示，与单纯造模组相比，在模型组中过表达SATB1可使小鼠肝脏坏死区域扩大，纤维化加重，炎症细胞浸润较单纯模型组进一步增多。同时，免疫组化与流式细胞术显示，CD45+F4/80+CD11b+Ly6G-Ly6Chigh 促炎表型单核来源巨噬细胞浸润比例也进一步增加，说明SATB1可能通过趋化单核来源巨噬细胞进一步加重AIH肝损伤。体外实验结果显示，在肝细胞中过表达SATB1可使CCL2表达和分泌增高，并增强了其培养上清对RAW264.7巨噬细胞的趋化能力，同时促进巨噬细胞向促炎表型分化。分子机制层面，双荧光素酶报告基因实验结果显示，SATB1可激活CCL2的转录过程从而促进CCL2表达。肝细胞与众多非实质细胞之间通过多种介质相互作用已被证明是驱动肝脏炎症发生发展的关键，以上结果提示AIH中肝细胞与单核巨噬细胞在炎症过程中存在信息传递过程，为AIH的干预提供了新思路。