胃癌候选肿瘤抑制基因BCL6B的抑癌作用及其分子机制

肿瘤抑制基因启动子区CpG岛甲基化导致基因表观遗传学失活在胃癌的发生发展中具有重要作用。申请者前期研究发现，在胃癌细胞中，BCL6B基因存在启动子区CpG岛高甲基化现象，进一步实验证实其甲基化导致该基因转录沉默；通过克隆该基因，构建其表达载体并转染胃癌细胞株，发现该基因抑制胃癌细胞的生长，提示BCL6B是胃癌新的肿瘤抑制基因。因此，迫切需要对新的甲基化基因BCL6B在胃癌中的抑癌作用及其分子机制进行深入研究。本项目拟进一步研究BCL6B对胃癌细胞和裸鼠种植瘤生长的影响，并从凋亡、增殖等角度探讨其抑制肿瘤生长的效应；同时采用cDNA芯片技术、双荧光素酶报道系统、染色质免疫共沉淀等方法探讨BCL6B调控基因的表达情况及其参与的肿瘤信号通路，以证实BCL6B是胃癌新的肿瘤抑制基因，并阐明其抑癌机制，为胃癌的早期诊断、预后判断和治疗新靶点提供重要理论基础。

肿瘤抑制基因启动子区CpG 岛甲基化导致基因表观遗传学失活在胃癌的发生发展中具有重要作用。本项目研究发现，BCL6B 为胃癌中新的启动子区高甲基化基因，且BCL6B 启动子区甲基化导致该基因转录沉默。在此基础上，我们克隆了BCL6B 基因，构建其表达载体并转染胃癌细胞株AGS和BGC823，分别在体外和体内证实BCL6B抑制胃癌细胞及裸鼠肿瘤的生长。从凋亡、增殖两个角度探讨其抑制肿瘤生长的功能效应，发现BCL6B同时通过内源性和外源性caspase依赖途径诱导胃癌细胞的凋亡。采用cDNA 芯片技术发现BCL6B调控基因的表达情况。本研究发现在胃癌组织中常见BCL6B启动子区甲基化现象。我们采用COBRA方法研究了两个独立的人群中309例胃癌患者以及20例正常对照胃组织BCL6B甲基化状态。在两家医院的胃癌人群中，49.0% (102/208) 及66.3% (67/101)的患者均检测到BCL6B基因甲基化，而20名健康对照者BCL6B启动子区无甲基化，这表明BCL6B甲基化具有肿瘤特异性。详细的BGS测序分析，证实了COBRA的研究结果，即在原发性胃癌中频繁发生BCL6B启动子甲基化，但在正常胃组织没有发生甲基化。对两个人群的胃癌患者BCL6B甲基化与临床病理特征的关系进行统计分析，发现胃癌患者发生BCL6B甲基化的生存期明显缩短。BCl6B启动子区甲基化可以在42.5% (17/40)胃癌患者的血浆中检测到，甲基化BCL6B很可能是预测胃癌发生的血浆DNA标志物。