miR-27a与核受体PPARr在急性呼吸窘迫综合征中相互表达调控的促炎作用及其机制研究

Inflammtion bursting is crucial course in acute respiratory distress syndrome （ARDS）. It is showed that the pro-inflammatory factor miR-27a is over-expressed，and the peroxisome proliferator-activated receptor gamma （PPARr）expression is down regulated in protein rather than mRNA during ARDS，but the relationship between them is not clear. Our previous study has demonstrated that miR-27a and PPARr can down regulate each other significantly. Therefore，we hypothesize that miR-27a may decrease PPARr expression at transcriptional level，while PPARr may decrease miR-27a expression via binding to the promotor region of miR-27a expression gene，and the mutual regulation of miR-27a and PPARr may play an important role in the pathogenesis of ARDS. In this study，we try to confirm the hypothesis and elucidate the corresponding mechanism by luciferase reporter assay，EMSA，ChIP，in vitro inflammatory cell model，in vivo mouse ARDS model，etc. This research may provide new evidence for elucidating the role and mechanism of inflammatory regulation by miR-27a and PPARr in ARDS，which may pave a way for developing novel therapeutic strategy for the treatment of ARDS by targeting miR-27a and PPARr with corresponding inhibitors and agonists.

过度炎症反应是ARDS的本质。研究表明，炎症初期促炎因子miR-27a高表达，而抑炎因子核受体PPARr表达降低。基于前期研究发现miR-27a显著下调PPARr蛋白表达，而未影响其mRNA表达，PPARr可减少miR-27a表达，结合文献，我们推测：炎症时，miR-27a可能在转录后环节下调PPARr表达，进而削弱其与miR-27a表达基因启动子区结合而发挥的对miR-27a表达的负调控作用，形成恶性循环，促进炎症恶化。因此，本研究拟用萤光素酶报告基因检测、EMSA、ChIP实验、细胞炎症模型、小鼠ARDS模型、炎性介质检测等证实ARDS时miR-27a与PPARr相互负调控作用的存在，并阐明其调控机制与作用，为miR-27a及PPARr对炎症调控及其在ARDS中的作用机制提出新观点和证据，为应用miR-27a抑制剂与PPARr激动剂治疗ARDS的新策略提供实验和理论依据。

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是由各种致伤因素引起的全身过渡性、失控性炎症反应对肺组织的损害，表现为进行性低氧血症，进一步发展成呼吸衰竭，是临床上较常见急重症，病死率高。过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）在ARDS肺损伤的炎性细胞中表达降低，其活化后可在全身炎症反应组织中发挥显著的抑炎保护作用。我们前期研究发现ARDS患者及小鼠外周血白细胞PPARγ表达降低，其与miR-27a水平呈负相关。生物信息学及荧光素酶报告基因证实两者存在相互作用；课题旨在进一步阐明两者相互调控参与ARDS炎症反应机制。我们研究发现在LPS诱导的小鼠ARDS模型中，外周血及肺组织中miR-27a表达明显增高，PPARγ低表达。在课题进展课程中我们发现miR-27a参与ARDS炎症反应调控机制已有报道。结合相关文献及生物信息学预测结果，我们围绕PPARγ作为研究对象发现上游miR-129-5p对其有调控作用，PPARγ介导调节自噬参与ARDS炎症反应调控。我们研究发现在ARDS患者外周血中miR-129-5p高表达；在LPS诱导建立的人肺泡上皮细胞BEAS-2B炎症模型中，miR-129-5p同样存在明显高表达，同时PPARγ低表达并抑制自噬水平（BeclinI、LC3I/II表达降低）从而导致IL-6、TNF-α、IL-1β等炎症因子高表达。我们初步探索证实可在ARDS细胞炎症模型中，高表达的miR-129-5p通过作用于PPARγ并抑制其表达，同时抑制自噬水平从而导致炎症反应增强。该研究的主要的科学意义在于为PPARγ及与其作用的miR表达调控提供新的认识，该研究可能为急性呼吸窘迫综合征的临床治疗提供新的策略，即应用或联合应用PPARγ激动剂或者与其相互作用的miR抑制剂将可能更为有效的阻断过度炎症反应，减轻炎性肺损伤。