APL患者内皮祖细胞中PML/RARα融合基因的研究

As an essential component in hematopoietic microenvironment on which the acute promyelocytic leukemia (APL) cells are grown, the expression of endothelial progenitor cells (EPCs) is becoming the hotspot in recent studies. In this study, the EPCs in bone marrow of APL patients were screened by magnetic activated cell sorting system (MACS) for in vitro culture after identification by flow cytometry (FCM). The PML/RAR fusion gene in EPCs was obtained by amplification on cell culture detected by fluorescence in situ hybridization (FISH) assay; whether EPCs has tumorigenecity in APL patient is evaluated by animal transplant model. Our study may facilitates new understanding of the role of EPCs in hematopoietic environment in APL pathogenesis, as well as be significant in further investigating the role of EPCs in development of other leukemia.

内皮祖细胞（EPCs）是APL细胞赖以生长的造血微环境中重要细胞成分，成为近年来关注的热点。本课题将以APL患者骨髓中的EPCs为研究对象，采用免疫磁珠方法筛选APL患者骨髓中的EPCs，经流式细胞术（FCM）鉴定后进行体外培养。采用免疫荧光原位杂交（FISH）技术检测培养扩增的EPCs中PML/RARα融合基因；通过动物移植模型了解APL体内EPCs是否有成瘤特性。本课题的完成将对造血微环境中EPCs在APL白血病发病机制中的作用有新的认识，对进一步探索EPCs在白血病发生、发展中的作用有重要意义。

急性早幼粒白血病(APL)是一种以出血、凝血紊乱、极易形成弥散性血管内凝血等为特征的急性白血病。随着对微环境因素在肿瘤发病机制中认识的加深以及目前以化疗为主的综合治疗方法很难治愈肿瘤等因素，越来越多的学者希望通过改变肿瘤细胞生长环境来提高治愈率及延长肿瘤患者的长期生存.内皮祖细胞（EPCs）是APL细胞赖以生长的造血微环境中重要细胞成分，成为近年来关注的热点。本课题以APL患者骨髓中的EPCs为研究对象，采用密度梯度离心方法筛选APL患者骨髓中的EPCs；经荧光双染色鉴定后进行体外培养；采用免疫荧光原位杂交（FISH）技术检测培养扩增的EPCs中PML/RARα融合基因；通过动物移植模型了解APL体内EPCs是否有成瘤特性。本课题发现：1通过密度梯度离心法分选骨髓单个核细胞总量在1-9.35x10７ /L，存活率70%以上。2 通过贴壁换液培养APL骨髓中的EPCs，数量最低1.0x105 /L；最高2.75x106 /L；而正常对照分别为1x107 /L和2.725x107 /L。3免疫荧光原位杂交（FISH）技术检测3例APL患者培养扩增的EPCs中PML/RARα融合基因，结果为阴性。4通过动物移植试验发现APL患者EPCs移植NOD/SCID小鼠生存时间 35-70 天，中位生存时间45天； 正常人EPCs移植NOD/SCID小鼠分别为 50-90天和70天； 等体积生理盐水输入NOD/SCID小鼠分别为 60-120天和90天。与正常对照相比，移植小鼠主要损伤器官在肺，分析原因可能与EPC细胞尾静脉注射肺组织浓度较高容易发生移植物相关性肺炎有关。本课题在APL患者骨髓的EPCs中未检测到PML/RARα融合基因，提示APL患者骨髓的EPCs可能与APL细胞不具备相同的分子生物学改变，从另一侧面支持目前普遍认为APL是一种非造血干细胞起源的血液系统肿瘤的观点。动物移植实验反映 APL患者骨髓中无PML/RARα融合基因的EPCs对APL小鼠生存期存在明显影响，提示造血微环境中EPCs在APL白血病发病机制中起着重要作用，仍需进一步探讨。