基于表观遗传学探讨补益卫气防治HSF光老化的作用及机制研究

In this project, We studies on the the Effects and Mechanisms of Prevention and Treatment of HSF photo aging by Replenishing Defensive Qi Based on Epigenetics. Test the DNA total methylation level by the HPLC. The expression of DNMT1、SIRT1、BMIT1、EZH2 in HSF was detected by RT-PCR and Western Blot. The cycle distribution of HSF was detected by flow cytometry. Observe the ultrastructural changes of photoaging HSF in different concentrations of Yupingfeng Powder by transmission electron microscope. provide the scientific basis for the further development to characteristic protective of traditional Chinese medicine and clinical application of skin photo aging. We can provide experience and reference by clarifing the mechanism of action of chinese medicine with modern scientific

项目根据中医“益卫固表”的相关理论，采用血清药物学方法，以采用UV 照射诱导传代培养的人皮肤成纤维细胞建立HSF 光老化模型作为研究对象，以表观遗传学相关指标作为研究内容，检测光老化HSF 的DNA 总体甲基化水平，用RT-PCR 和免疫印迹法检测HSF 的DNMT1、SIRT1、BMIT1、EZH2 基因和蛋白表达；运用流式细胞仪检测不同浓度的玉屏风散处理后光老化HSF 周期分布情况；透射电镜观察不同浓度玉屏风散对光老化HSF 超微结构的影响，以探讨补益卫气对皮肤光老化的防治作用及其机制，从表观遗传学学角度阐明补益卫气防治皮肤光老化的作用及其机制，为进一步研制开发和临床应用皮肤光老化中医特色防护剂提供科学依据。为用现代医学理论阐明中医药作用机理提供借鉴。

皮肤光老化不仅影响美观，而且与临床上多种皮肤病及皮肤恶性肿瘤的发生密切相关，皮肤光老化的防治研究已经成为国内外研究热点。因此，在中医药中寻找高效无副作用的天然抗衰方法，具有重要意义。本项目以中医“益卫固表”的相关理论为切入点，基于表观遗传学角度，探讨益卫固表法对皮肤光老化的防护作用。.本项目建立人皮肤成纤维细胞光老化模型，采用玉屏风散含药血清进行干预，运用ELISA，RT-PCR，western-blot法检测玉屏风散对人皮肤成纤维细胞光老化的防护作用、对光老化人皮肤成纤维细胞DNA 总体甲基化水平，DNMT1、SIRT1、BMi-1、EZH2 基因和蛋白表达以及超微结构的影响，从表观遗传学角度阐明补益卫气防治皮肤光老化的作用及其可能机制，为中医益卫固表法防治皮肤光老化提供客观依据。.实验结果显示，光老化模型组细胞DNA总体甲基化水平明显下降（P<0.05），β-半乳糖苷酶染色阳性率明显升高（P<0.05），DNMT1、Sirt1、Bmi-1、EZH2 基因和蛋白表达量均有不同程度的降低，细胞超微结构出现线粒体肿胀、细胞核膜内折等显著衰老改变。经玉屏风散含药血清干预后，玉屏风各剂量组与模型组对比DNA总体甲基化水平均有所升高（P<0.05），细胞中β-半乳糖苷酶染色阳性率明显下降（P<0.05）。玉屏风散大、中剂量组DNMT1、Sirt1、Bmi-1、EZH2基因和蛋白表达量均由不同程度的升高，存在显著差异（P＜0.05）；细胞内细胞器尤其是线粒体的破坏明显减轻，细胞形态也有明显的改善，作用效果以大剂量玉屏风散含药血清更为显著。研究结果提示玉屏风散通过调控细胞的DNA甲基化水平，对紫外线所致的人皮肤成纤维细胞光老化具有一定的防护作用。