游离移植脂肪存活与脂肪细胞动态分化调控机制的相关性研究

A relatively high absorptivity limits the clinical application after free autologous fat grafting. The way how to regulate the mechanism of adipose tissue after transplantation in vivo is the key to ensure its clinical application. It is already approved that adipose has enhanced its tolerance against anoxic condition and been able to survive in vitro through Dedifferentiation-Redifferentiation, then, if there is a mechanism of dynamic differentiated regulation on adipocytes in vivo? At early study, weight curve appeared a tendency as slow increase after the grafting late time, the transplants released lipide in early stage, and abundant immature adipocytes re-differentiated in mid-late stage. Thus, we presume that: there is a dynamic change of adipose Dedifferentiation-Redifferentiation in vivo, and free transplanted fat survival is closely related to the mechanism of dynamic differentiated regulation on adipocytes. This article drafts to create a dilator-compressed rat's fat pad ischemia model and a GFP marker free fat grafting model，introducing periodical extension technique、gene test method、pathological analysis technology etc, to study the ability of differentiated regulation on adipocytes under anoxia in vivo, and its correlation with free transplanted fat survival emphatically, clarifying the internal mechanism of free transplanted fat survival, laying a solid theoretical foundation for improving tissue survival ratio, promoting a widely application of fat freeing and transplantation clinically.

自体脂肪游离移植后较高的吸收率限制了其临床应用。如何在体内实现对移植后脂肪组织存活机制的调控，是保障其临床应用的关键。我们已经证明体外环境下脂肪细胞通过去分化-再分化变化增强细胞对缺氧环境的耐受力并存活，那么，体内环境中脂肪细胞是否存在动态分化调控机制？前期研究发现，游离脂肪移植后湿重曲线晚期出现细微上升的变化趋势，移植物早期释放脂质，中晚期出现大量幼稚脂肪细胞的分化。据此，我们推测：体内环境中存在脂肪细胞去分化-再分化的动态变化，并且游离移植脂肪存活与脂肪细胞动态分化调控机制密切相关。本项目拟建立扩张器压迫大鼠脂肪垫缺血模型和绿色荧光蛋白标记游离脂肪移植模型，采用定期扩张技术、基因检测手段、病理分析技术等，重点研究体内缺血环境脂肪细胞的分化调控能力，及其与游离移植脂肪存活的密切相关性，阐明移植脂肪细胞存活的内在机制，为提高组织存活率，促进脂肪游离移植的广泛临床应用打下坚实的理论基础。

背景.在体外环境中，脂肪细胞能去分化为成纤维细胞状细胞，并获得了增殖能力和多向分化潜能，这种细胞被认为具有修复各种组织和器官的能力。然而，在体内环境内，生理或病理条件下，这种去分化变化是否能发生，还是未知的。.方法.我们将扩张器置入鼠的腹股沟脂肪垫下，注水法扩张，在不同的时间点取材，进行形态学、组织学、细胞学、超微结构和基因分析。并将绿色荧光小鼠的脂肪细胞纯化后，移植入C57小鼠的腹股沟脂肪垫内，不同时间点取材后，通过荧光成像技术和全组织染色进行观察。.结果.扩张后的脂肪组织明显比对侧未扩张的脂肪组织更薄，质地更坚韧，并有更多的血管网分布。HE染色和透射电镜检测均发现在扩张后的脂肪组织内含有更少量的单房脂肪细胞，大部分的单房脂肪细胞通过丢弃脂滴而发生了形态改变。免疫组化结果显示扩张后的脂肪组织内存在增多的具有增殖能力的细胞，并且这些细胞来源于脂肪细胞。当扩张器撤去后，脂肪组织中可见大量新生的脂肪细胞。荧光成像技术显示部分脂肪细胞移植后，缺血缺氧环境下能够成活，全组织染色显示成活的细胞经历了去分化的过程，由单房脂肪细胞变成多房脂肪细胞，最后称为成纤维细胞状细胞。.结论.成熟脂肪细胞在体内环境中发生去分化，该变化可能是脂肪组织自我修复的机制之一。脂肪细胞去分化为具有类似干细胞能力的细胞，在组织再生的研究中扮演重要角色，尤其是脂肪游离移植的研究。