基于AR相关信号通路调控雄激素平衡探讨针灸预处理对卵巢储备功能的保护机制

Based on preventive treatment, this project would like to confirm the protection mechanism of acupuncture and moxibustion pretreatment's function of ovarian reserve, and propose a new hypothesis: the androgen balance mediated by AR is a key factor of acupuncture and moxibustion pretreatment's function of ovarian reserve, which could promote the follicle growth by increasing FSHR levels and prevent of follicular atresia by inducing the expression of miR-125b. Therefore, the research group will use immunohistochemistry,Elisa and RT-PCR to observe the index of DOR rats before and after acupuncture and moxibustion pretreatment, including ovarian reserve function (follicle number, AMH, etc.), the level of serum testosterone(T, DHT and DHEA),FSHR protein and AR mRNA expression of ovarian tissue, miR-125b expression of granulosa cells, so as to observe the protective effect and effect difference of ovarian Reserve, further analyze the relationship between androgen balance and acupuncture effect through AR signaling pathway, whether miR-125b and FSHR are the key fators. This project provides a new experimental evidence for preventive treatment of DOR and POF with acupuncture and moxibustion.

本项目依据“治未病”思想，拟证实针灸预处理对卵巢储备功能的保护效应，并提出保护机制的新假说，即：雄激素受体（AR）介导的雄激素稳态平衡是针灸预处理保护卵巢储备功能的关键因素，并通过对卵泡刺激素受体（FSHR）和miRNA-125b的调节，提高FSH敏感性，避免卵泡闭锁，从而促进卵泡正常发育。因此课题组将运用免疫组化、Elisa和RT-PCR等技术，通过观察造模前针灸和造模开始同时针灸对卵巢储备功能减退模型大鼠卵巢储备能力、血清雄激素水平、AR相关信号通路指标的影响，明确针灸预处理对卵巢储备功能的保护效应，及“未病先防”“既病防变”的效应差异，并进一步分析AR相关信号通路调控雄激素稳态平衡在针灸预处理保护卵巢储备功能中的关键作用，为卵巢储备功能减退（DOR）和卵巢早衰（POF）的针灸防治提供实验依据。

【背景】目前雄激素效应对卵泡发育和女性生殖的调节作用成为研究热点。艾灸对改善卵巢功能疗效确切，但大部分文献都是针对疾病状态的治疗，很少有研究关注“预防”，作用机理研究尚未有针对雄激素平衡和AR介导信号通路，不同时间介入艾灸干预对卵巢功能的保护效应和作用机制是否存在差异也不明确。【目的】观察不同时间介入艾灸预处理对卵巢储备功能减退（DOR）大鼠卵巢功能的影响，分析其保护效应和作用机制。【方法】SD健康雌性大鼠随机分为空白组、模型组、艾灸1组和艾灸2组。用雷公藤混悬液灌胃复制DOR大鼠模型。造模后艾灸1组和艾灸2组予麦粒灸治疗，穴位为“肾俞”、 “关元”， 每日采用其中一组穴位，两组穴位轮流交替使用。以麦粒灸（5 mg/壮）直接灸相关穴位，每壮需燃尽，每穴7壮，每日1次，每周5次，共治疗4周。其中艾灸1组为艾灸干预4周后造模，属单纯疾病前干预；艾灸2组为造模同时艾灸2周，造模结束继续艾灸2周，属疾病早期干预。各组艾灸结束时分别检测大鼠体质量、卵巢指数、AMH、FSH、E2、T、DHEA含量及AR、FSHR、miRNA-125b基因相对表达量变化。【结果】艾灸1组和艾灸2组AMH、DHT 水平显著高于模型组，艾灸1组和艾灸2组FSH、T、DHEA水平显著低于模型组。两个艾灸组间AMH、FSH、T 和DHEA水平均无差异。艾灸1组DHT水平明显高于艾灸2组。艾灸2组E2水平显著低于模型组，但艾灸1组E2水平与模型组无差异。与模型组相比，艾灸1组和艾灸2组AR mRNA表达量显著升高，两个艾灸组间AR mRNA表达量无差异。与空白组和模型组相比，艾灸2组FSHR mRNA表达量明显升高；但艾灸1组FSHR mRNA表达量与模型组无差异。与模型组相比，艾灸1组miRNA-125b mRNA表达量明显升高，但艾灸2组miRNA-125b mRNA表达量与模型组无差异。【结论】 我们的研究发现，疾病发生之前艾灸和疾病早期艾灸均可保护卵巢功能，均与AR介导的雄激素稳态平衡相关，但两者的效应有差异，作用机制并不相同。艾灸预处理和卵巢保护效应的时效关系，还有待进一步研究。