microRNA-125b下调SRF抑制动脉平滑肌细胞增殖和迁移研究

动脉平滑肌细胞（ASMCs）过度增殖迁移是导致下肢动脉硬化闭塞（ASO）的关键因素。前期研究发现，miR-125b在ASO中表达下调，上调miR-125b可通过下调靶基因SRF（血清应答因子）抑制ASMCs增殖和迁移，其内在分子机制有待于阐明。联系SRF与辅助因子ELK-1形成复合物在转录水平上调c-fos等促进肿瘤生长和转移这一机制，我们提出科学假设：miR-125b通过调控SRF/ELK-1复合物形成以及转录活性，减少下游c-fos等表达，抑制ASMCs增殖迁移，最终延缓ASO进展。本研究拟采用荧光素酶报告基因、ChIP、EMSA等方法，旨在获得miR-125b调控SRF/ELK1复合物形成以及转录活性的可靠证据，并阐释这种机制在影响ASMCs增殖迁移中的作用。本项目将揭示miR-125b调控ASMCs增殖迁移的新机制，为确立miR-125b作为治疗ASO的新靶点提供更充分的科学依据。

下肢动脉硬化闭塞（ASO）的发病率逐年上升，严重危害我国人民健康。动脉平滑肌细胞（ASMCs）增殖和迁移失控是导致ASO的主要原因，microRNA在其中扮演重要角色。我们既往研究发现ASO中miR-125b表达下调显著，但其在ASO疾病进程中的作用机制未知。. 在本项目中，我们发现miR-125b主要表达于动脉的平滑肌层，并且在ASO动脉平滑肌层中表达水平明显下降，这提示miR-125b的水平变化主要对动脉壁中的平滑肌细胞（ASMCs）产生影响。进而在体外培养的ASMCs中进行了一系列的功能试验，发现升高miR-125b水平后，可明显抑制细胞的增殖能力和迁移能力，同时促进细胞凋亡增多。. 血清应答因子（SRF）的mRNA 3’UTR区域存在可以与miR-125b结合的位点，提示SRF是miR-125b的靶基因。在体外培养的ASMCs中，升高miR-125b水平可显著抑制SRF蛋白的表达；抑制miR-125b则可明显促进SRF蛋白的表达，而SRF的mRNA水平并不受影响，提示miR-125b对SRF的调控可能在转录后水平完成。将通过双荧光素酶基因报告法证明，miR-125b可直接与SRF的mRNA 3’UTR结合调控其表达。进一步通过回复实验证实，SRF直接参与了miR-125b对ASMCs功能的调控。除可直接下调SRF表达之外，miR-125b同时也可通过抑制MAPK-ERK信号通路的磷酸化，降低SRF磷酸化水平并减少胞浆/胞核转位，并减弱了SRF的转录因子活性，进而下调下游细胞周期蛋白CyclinD1等的表达。. 最终通过动物模型证实过表达miR-125b可以显著减轻动脉狭窄程度，提示miR-125b可作为潜在的治疗靶点。. 本项目揭示了miR-125b/SRF调控ASMCs促进ASO进程的机制，为治疗ASO提供了潜在靶点。.