主动脉树突状细胞亚群在动脉粥样硬化过程中对CD4+T细胞的调控及机理研究

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vessel wall,and multiple CD4+T cell subsets play important roles in AS but the mechanisms that regulating their production is unknown. The dendritic cells (DC) that contains multiple subsets, play a central role in the initiation and regulation of immune response and determine the type of immune response. Our preliminary experiments found that DC percentage in the aorta vessel wall increased during AS, Th1 cell and Th17 cell changed with the progress of AS but their effect phases is different. We make propose that DC subsets may change their natural immune functions with the progress of atherosclerosis,as a result, DC subsets involved in the regulation of CD4+T cell immune response,thus determine their proatherogenic or anti-atherogenic activity in atherosclerosis. We aim to study the mechanisms of DC subsets in controlling AS by regulating CD4+T cells immune response. Apoe-/- mice were used as an AS animal model, cellular and molecular immunological methods were used here, by analyzing constitutes of aorta vessel wall and the effetor molecules secretion by aorta DC subsets in different phases of AS, We aim to clarify the mechanisms of DC subsets in controlling of CD4+T cells activation，proliferation and differentiation. Our results will help to understand the mechanisms of DC subsets of the aorta vessel wall in atherosclerosis,and make contribution on the understanding of the immunological mechanisms in atheroscelosis.

动脉粥样硬化（AS）是一种血管壁的慢性炎症性疾病，多种CD4+T细胞亚群在AS中发挥不同的作用，而调控CD4+T细胞各亚群产生的机制尚不清楚。树突状细胞（DC）是包含多亚群的异质性群体，处于启动和调控获得性免疫应答的中心地位并决定免疫反应的类型。我们预实验发现AS发生时主动脉壁中的DC比例显著增加，Th1细胞和Th17细胞在AS过程中动态变化且作用时相不同。据此推测AS过程中主动脉DC亚群的组成和天然免疫功能状态发生变化，它们通过调控CD4+T细胞反应而影响AS的发生发展。本项目以Apoe-/-为AS小鼠模型，拟采用现代细胞和分子免疫学等研究手段，对比分析AS不同时期主动脉DC亚群的组成、表型及效应分子分泌等功能，明确AS过程中DC亚群对CD4+T细胞活化、增殖和分化的影响及调控机制。本研究有助于理解主动脉DC亚群在AS中的作用及机制，为探明AS的免疫学发病机制提供实验基础和理论依据。

动脉粥样硬化（AS）是一种血管壁的慢性炎症性疾病，多种CD4+T细胞亚群在AS中发挥不同的作用，而调控CD4+T细胞各亚群产生的机制尚不清楚。树突状细胞（DC）是包含多亚群的异质性群体，处于启动和调控获得性免疫应答的中心地位并决定免疫反应的类型。本课题我们原计划探讨主动脉DC亚群对CD4+T细胞的调节在动脉粥样硬化中的作用，但由于主动脉DC亚群数量极少，导致许多实验难以开展，我们及时调整了实验方案，通过研究脾脏中与主动脉中发育相对应的DC亚群进行研究。我们主要探讨了脾脏Batf3依赖的CD8α+ DCs亚群对CD4+T细胞的调节作用在动脉粥样硬化中的作用及作用机制。从分子水平，还进一步探讨了DC表达的TGF-β在动脉粥样硬化中的作用及作用机制，以期研究成果能对将来临床干预动脉粥样硬化相关的心血管疾病进行指导。研究成果总结如下：.Batf3依赖的DC亚群在动脉粥样硬化中的作用仍不十分清楚。我们通过杂交，构建一种缺陷Batf3和Apoe的Batf3-/-Apoe-/-双缺陷鼠。利用该小鼠模型研究Batf3缺陷对CD8α+ DCs的影响，以及最终对T细胞反应及对动脉粥样硬化的影响。结果发现，Batf3缺陷时，引起脾脏CD8α+ DCs和主动脉对应的CD103+ DCs的比例及数量显著降低。与对照鼠Apoe-/- 相比，双缺陷鼠动脉粥样硬化斑块面积显著减小，并且Th1显著降低。通过体内外实验发现，CD8α+ DCs通过诱导Th1而使动脉粥样硬化加重。CD8α+ DCs诱导Th1与高脂饮食使CD8α+ DCs高表达CD86和高分泌IL-12有关。我们也发现，主动脉中双缺陷鼠CCL5表达降低，且主要表达于斑块巨噬细胞。且Th1分泌的细胞因子IFN-γ可促进巨噬细胞表达CCL5，这与我们观察到的Batf3缺陷时免疫细胞在斑块中的浸润减少有关。总之，我们发现Batf3依赖的CD8α+ DCs通过诱导Th1，而Th1通过促进巨噬细胞CCL5的表达，促进免疫细胞在斑块中的浸润，引起动脉粥样硬化斑块加重。.我们也探讨了DC表达的TGF-β1在动脉粥样硬化中的作用及作用机理。首先通过cre-loxp技术，成功杂交出DC不表达TGF-β1的小鼠(cre+)，然后通过骨髓嵌合进动脉粥样硬化的易感小鼠Apoe-/-，通过高脂饮食诱导小鼠发生动脉粥样硬化。在给嵌合鼠高脂12周后结果发现，与对照组c