肠上皮内γδT细胞诱导抗原特异性Treg的体内机制及其对肾移植慢性排斥的抑制作用研究

慢性排斥反应是目前移植物失功的主要原因。研究显示通过口服移植物抗原可内源性诱导抗原特异性调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)产生，抑制排斥反应，减轻移植物损伤。但口服诱导抗原特异性Treg产生机制不明。我们前期工作表明，肠道上皮内γδT细胞 （TCRγδintraepithelial lymphocytes,TCRγδ IEL)能在体外直接诱导na?ve T细胞分化为Treg ，提示Treg可由TCRγδIEL诱导产生这一全新机制。为探讨TCR γδIEL在口服诱导抗原特异性Treg产生中的作用及其相应机制，本研究拟以小鼠肾移植为动物模型，首先明确TCRγδIEL在口服抗原减轻移植物慢性排斥反应中的作用；然后探讨TCR γδIEL能否在体内诱导抗原特异性Treg；最后进一步探讨TCRγδIEL诱导Treg产生的分子机制，为临床应用口服抗原治疗慢性排斥反应奠定基础。

目前，临床上影响移植物存活时间并最终导致移植物失功的主要原因是慢性排斥反应，探寻安全有效的抗原特异性免疫抑制方法，以实现移植物长期存活是器官移植领域最重要的任务之一。大量的文献和我们前期试验都表明，外源性给予体外诱导扩增的移植器官抗原特异性reg(regulatory T cells，Treg)细胞，能够减轻受体对移植器官的免疫排斥损害，明显延长移植物的存活时间。口服诱导耐受具备无毒、给药容易以及抗原特异性的靶向诱导等突出优点，目前已经在多种自身免疫性疾病的治疗中获得了肯定的效果。有研究显示，口服供体抗原能够减轻移植患者的免疫排斥反应，对移植物慢性排斥损伤的治疗有十分积极的作用。通过口服抗原，内源性诱导抗原特异性Treg细胞产生，可能是降低排斥反应，减轻移植物损伤的关键途径之一，但其机制尚不明确。在本研究中我们发现，肠道上皮内γδT细胞 （TCRγδintraepithelial lymphocytes,TCRγδ IEL)能在体外直接诱导naïve T细胞分化为Treg ，相关文献亦有报道TCRγδ IEL对于Treg增殖及功能的影响，这点提示我们：在体内，Treg可由TCRγδIEL诱导产生从而发挥免疫调节作用。为探讨TCR γδIEL在口服诱导抗原特异性Treg产生中的作用及其相应机制，我们从肠道分离培养出较高纯度的TCR γδ IEL细胞，在体外观察到TCR γδ IEL细胞诱导特异性Treg细胞产生，再用超速离心发提取Treg细胞分泌的exosome，灌饲受体小鼠.在小鼠肾移植动物模型上，观察到TCR γδ IEL基因敲除受体小鼠存活时间短于对照组；肌酐、尿素氮水平高于对照组，移植肾的病理损害重于对照组。最后，初步探讨TCRγδIEL诱导Treg产生的分子机制。本研究为临床应用口服抗原治疗慢性排斥反应奠定基础。