PRRSV编码蛋白与宿主蛋白相互作用的研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染猪肺泡巨噬细胞。PRRSV利用宿主蛋白完成自我复制，但宿主蛋白如何参与调节病毒的复制过程（包括：吸附、穿入、脱壳、基因组复制、病毒组装和释放）还没有系统性的研究。我们首次以PRRSV全基因组编码蛋白（包括结构蛋白和非结构蛋白）为"诱饵"，采用酵母双杂交的方法筛选猪肺泡巨噬细胞的cDNA文库，得到的试验结果用GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证。根据试验结果，我们将绘制首张PRRSV编码蛋白与宿主蛋白相互作用网络图谱，并选取1-2 宿主蛋白为重点研究对象，深入研究宿主蛋白如何调节PRRSV复制的机制。同时以NSP1等为重点，研究该蛋白如何与宿主蛋白共同作用，抑制dsRNA诱导的天然免疫反应和I型IFN产生，为PRRS的基础研究和综合防治提供理论依据。

通过《PRRSV编码蛋白与宿主蛋白相互作用的研究》课题的开展，我们首次以PRRSV 全基因组编码蛋白（包括结构蛋白和非结构蛋白）为"诱饵"，采用酵母双杂交的方法筛选猪肺泡巨噬细胞的cDNA 文库，得到的试验结果用GST-pulldown 和免疫共沉淀试验验证。根据试验结果，绘制了首张PRRSV 编码蛋白与宿主蛋白相互作用网络图谱。 选取宿主蛋白Anexin A2为重点研究对象，深入研究宿主蛋白如何调节PRRSV 复制的机制，相关的文章发表在《virus research》上。 . 以HP-PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞为研究模型，我们发现HP-PRRSV感染或该病毒的核酸能够激活炎症小体，诱导强烈的炎症反应。随后发现了一种新的PRRSV RNA模式识别受体-RNA解旋酶19A（DDX19A），该受体能识别PRRSV RNA，激活炎症反应信号通路，促进炎症细胞因子的分泌。该研究不仅对HP-PRRSV感染诱导的炎症反应有重要意义，也为其他病毒诱导炎症的分子机理研究提供借鉴，该成果发表在《Journal of immunology》上。. 在成功的构建了猪肺泡巨噬细胞cDNA文库的基础上，我们还构建了BHK21细胞的cDNA文库；同时利用实验室建立的成熟酵母双杂交体系完成了EMCV全基因组编码基因与宿主蛋白相互作用的筛选和相互作用图谱的构建，为探索EMCV病毒的复制及致病机理奠定坚实的基础，其中一篇文章发表在《Journal of Biological Chemistry》杂志上。该酵母双杂交系统还成功地应用在猪瘟病毒复制的研究上，和仇华吉研究员合作，发现宿主蛋白PCBP1参与猪瘟病毒的复制， 相关的文章发表在《Journal of Virology》上。. 总结：在完成上一个自然基金面上项目时，我们一共发表了4篇SCI文章和6篇核心期刊文章，其中3篇研究论文发表在高水平的专业杂志上（JBC，JV和JI）。同时申请了一项专利。两位青年助理研究员在参与工作的中得到锻炼，分别获得了自然科学基金青年基金的支持。