瑞喹莫德通过促进DC-NK相互作用增强Th1型免疫反应机制研究

It is well documented that TLR7/8 agonist resiquimod has potent Th1 adjuvant activity by extensive in vivo and ex vivo studies. The predominant evidence came from the studies demonstrating the ability of this molecule to activate APCs and induce immune modulatory cytokines IL-12. Our preliminary study showed that R848 boosted stronger Th1 immune response in vivo although it induced the less level of IL-12 production by bone marrow derived DC than CpG in vitro. Interestingly, the higher percentage of NK cells with up-regulated activation marker and enhanced IFN-g production was detected in lymph nodes from R848 immunized mice. According to these results, we hypothesize that the new mechanism in which R848 boosts Th1 immune response is increasing IL-12 and IFN-g production by DC and NK cells through recruitment of NK cells into lymph nodes and enhancement of DC-NK crosstalk. This proposal seeks to reveal the unknown mechanism of R848 induced NK recruitment and DC-NK crosstalk in promoting Th1 response. This study will provide us new direction for screening and development of new Th1 adjuvant and also guide the clinic application of R848 in future.

大量体内及体外实验证明TLR7/8配体瑞喹莫德（R848）是一种有效的Th1型疫苗佐剂，目前认为其主要机制是诱导DC细胞成熟并促进IL-12分泌。在前期实验中我们发现R848在体外诱导DC分泌IL-12能力仅为CpG的1/3，但在体内能更有效地诱导Th1型免疫反应；同时观察到以R848为佐剂免疫小鼠后淋巴结内NK细胞数目显著增加，NK细胞活化标志表达明显上调，分泌IFN-g能力显著增强。因此我们推测R848能在体内有效的募集NK进入淋巴结，促进NK-DC相互活化并分泌大量IL-12和IFN-g，从而增强Th1型细胞免疫是其作为Th1型疫苗佐剂的新的重要机制。本课题通过体内和体外实验，逐步验证这一假设并阐明R848诱导NK细胞向淋巴结聚集，促进DC-NK相互作用，增强Th1型免疫反应的具体机制。此研究将为新型疫苗佐剂的筛选和研究提供新的思路，并为未来R848临床运用提供指导。

大量体内及体外实验证明TLR7/8配体瑞喹莫德（R848）是一种有效的Th1型疫苗佐剂，目前认为其主要机制是诱导DC细胞成熟并促进IL-12分泌。在前期实验中我们发现R848在体外诱导DC分泌IL-12能力仅为CpG的1/3，但在体内能更有效地诱导Th1型免疫反应；同时观察到以R848为佐剂免疫小鼠后淋巴结内NK细胞数目显著增加，NK细胞活化标志表达明显上调，分泌IFN-g能力显著增强。因此我们推测R848能在体内有效的募集NK进入淋巴结，促进NK-DC相互活化并分泌大量IL-12和IFN-g，从而增强Th1型细胞免疫是其作为Th1型疫苗佐剂的新的重要机制。本课题首先利用清除了NK细胞的小鼠或IFN-g基因敲除小鼠阻断DC-NK相互作用，结果显示R848在上述模型中诱导抗原特异性TH1型免疫反应能力显著降低，反向证明了R848是通过募集 NK 细胞并促进 DC-NK相互作用而发挥Th1型疫苗佐剂作用这一假设。随后我们用不同TLR配体刺激从体内分离纯化DC和NK 细胞并检查上清和细胞表面分子变化，阐明了与LPS和CpG-C相比较，R848能高效激活DC和NK细胞并使其分泌IL-12和IFN-g，从而促进DC-NK相互作用。同时R848能显著刺激DC分泌NK特异性趋化因子CXCL9/CXCL10并诱导NK细胞上调趋化因子受体CXCR3和淋巴结归巢受体CD62L，在Transwell试验中有效刺激DC诱导NK细胞向下室迁移，这可能是R848有效募集NK细胞进入淋巴结的机制。上述结果证实了R848佐剂作用的新机制并解释了其作用原理，此研究将为新型疫苗佐剂的筛选和研究提供新的思路，并为未来R848临床运用提供指导。