lncRNA在JAK2V617F突变阳性的经典型骨髓增殖性肿瘤发病中的作用研究

The classic myeloproliferative neoplasms (MPNs)are disorders of clonal hematopoietic stem cell.The mutation of JAK2V617F is one of the pathogenesis of the disease.But there are still other mechanisms take part in the pathogenesis.Our previous research showed the epigenetic regulations play important roles in the pathogenesis of classic myeloproliferative neoplasms. The long noncoding RNA(lncRNA)is a kind of noncoding RNA playing important epigenetic regulation.In this study, we will use the lncRNA expression microarray and the bioinformatics to assess the differentially expressed lncRNAs of MPNs patients,then we will use the techniques such as RNA interference technique、RIP、RNA pull down and other techniques to explore how the lncRNA take part in the pathogenesis of MPNs. The purpose of this study is to gain considerable insight into the mechanisms of JAK2V617F-positive classic myeloproliferative neoplasms. This may provide not only important evidence for understanding the mechanism of JAK2V617F-positive classic myeloproliferative neoplasms but also a potential targeted therapeutic model for classic myeloproliferative neoplasms.

经典型骨髓增殖性肿瘤（MPN）是造血干细胞疾病，JAK2V617F突变导致JAK/STAT激活是其发病机制之一，还有其他未知机制参与致病。本课题前期研究提示表观遗传调控异常在其发病中发挥重要作用，患者除存在基因突变等遗传学异常外，还存在甲基化异常等表观遗传异常。本课题拟在前期基础上，进一步研究有重要表观遗传调控作用的长链非编码RNA(lncRNA)在JAK2V617F突变阳性的经典型MPN发病中的作用：用lncRNA芯片等技术筛选JAK2V617F（+）的经典型MPN与健康对照间差异表达的关键性lncRNA，用细胞转染、siRNA、cDNA芯片、RIP、RNA pull down等技术研究关键性lncRNA对细胞功能的影响及分子调控机制。本课题有利于探讨lncRNA分子在JAK2V617F突变阳性的经典型MPN发病中的作用，完善对该疾病发病机制的认识，为临床诊断和治疗提供新的靶点。

经典型骨髓增殖性肿瘤（MPN）是造血干细胞疾病，以JAK2 基因突变为代表的遗传学异常只是经典型MPN 患者的部分发病机制，还有其他未知机制参与致病。有报导在经典型MPN 患者检测到DNA 甲基化、组蛋白乙酰化及非编码RNA 的异常，我们前期实验也发现在经典型MPN 患者存在DNA 甲基化异常，说明表观遗传学调控异常也参与了经典型MPN 的发病。长链非编码RNA 是重要的表观遗传调控因子，有证据表明长链非编码RNA 与血细胞的增殖分化等相关，但其在经典型MPN 发病中的作用尚未得到研究。本课题利用lncRNA 芯片技术，利用分层聚类分析等生物信息学分析手段，结合基因数据库及相关网站的数据，分析获取差异表达的lncRNA基因，从中预测及筛选可能与JAK2V617F(+)的经典型MPN发病密切相关的lncRNA共9个，利用RT-PCR检测验证上述关键性lncRNA的表达水平，比较其在JAK2V617F(+)的经典型MPN患者与健康志愿者间表达水平是否存在差异，验证lncRNA芯片的筛选结果，并最终选取上调基因RP11-432I5.4和下调基因SNHG18、 AC087501.1、FAM20A作为研究对象。通过CC8检测，细胞凋亡检测和EMT转移检测进行功能验证。随后选取FAM20A作为研究对象，选取mTOR通路为研究对象，研究FAM20A的作用机制。通过比较干扰FAM20A前后mTOR通路芯片表达谱的差异，发现IGF1,FOS,ITGAM,CTNNB1,RPTOR,AKT2的差异表达显著，很可能是FAM20A的下游调控基因。通过该课题的研究探讨了lncRNA 分子在JAK2V617F 突变阳性的经典型MPN 发病中的作用，完善了对该疾病发病机制的认识，为临床诊断和治疗提供新的靶点。