OECs的转化及其脊髓实质内移植治疗晚期脊髓损伤小鼠的实验研究

The remarkably function of neuroregeneration of olfactory ensheathing cells (OECs) bear on its special biological property. However the source of OECs is very limited. There are need craniotomy to obtain the OECs for autologous cell transplantation, so it has very high risk for patients of spinal cord injury, and the ethical problems also is the obstacle for allografts cell transplantation as well as the immunologic rejection . Schwann cells (SCs) conveniently, is a important seed cells for autologous cell transplantation to the patient which have peripheral nerve injur, but its function of neuroregeneration in the central nervous system is very weak. We attempts to induced the transformation of SCs to OECs(ST-OECS), and observe the survival, migration, neuroregeneration, remyelination, et al. which transplantated the ST-OECs into the spinal cord parenchyma in vivo and in vitro. To investigate the mechanism of promote nerve regeneration and to provide experimental data for clinical application.

嗅鞘细胞（OECs）促进中枢神经系统神经功能修复作用突出，与其本身所具有的特性有关，但来源非常有限，自体移植需要开颅取材，损伤大风险高，而异体移植存在伦理及免疫排斥问题。雪旺细胞（SCs）取材方便，是进行自体移植的优秀种子细胞，但其促进中枢神经系统神经功能修复作用较弱，本研究试图在成熟体细胞诱导转化方面进行研究，探索由SCs转化来的OECs（ST-OECs）细胞培养节点及培养基配方，观察ST-OECs在体内外脊髓实质内存活、迁移、再髓鞘化、穿越胶质瘢痕的特点，同时探讨其促进神经再生作用机制，为自体ST-OECs细胞移植治疗晚期脊髓损伤解决细胞来源问题并兼顾治疗效果。

雪旺细胞（SCs）取材方便，是进行自体移植的优秀种子细胞，但其促进中枢神经系统神经功能修复作用较弱，本研究试图在成熟体细胞诱导转化方面进行研究， 探索由 SCs 转化来的 OECs（ST-OECs）细胞培养节点及培养基配方，观察 ST-OECs 在体内外脊髓实质内存活、迁移、再髓鞘化、穿越胶质瘢痕的特点，同时探讨其促进神经再生作用机制，为自体 ST-OECs 细胞移植治疗晚期脊髓损伤解决细胞来源问题并兼顾治疗效果。主要方法包括：1、取新生小鼠嗅球和坐骨神经，消化成单个细胞，通过流式细胞分选仪获得纯化嗅鞘细胞;2、通过miRNAs芯片技术获得两组细胞的总miRNAs，进行差异筛选。对差异miRNA进行非监督层次聚类，利用热图的形式展示差异miRNA在不同样本间的表达模式，确定初步研究对象为miRNA-207， miRNA-126a-3p， miRNA-125b-5p。3、以雪旺细胞系M1700为转染对象。以lip2000为microRNAs转染试剂，将miRNAs（mmu-mir-207，mmu-miR-126a-3p，mmu-miR-125b-5p）的模拟物mimics转染到雪旺细胞中，并行qPCR检测转染前后雪旺细胞内目标miRNAs的变化。于转染后的24小时候进行免疫荧光观察，利用免疫荧光累积光密度值（IOD）值检测特异性标记物GFAP/S100/P75/L1蛋白的表达。结果:雪旺细胞转染miRNAs后24小时，免疫荧光检测结果：通过IOD值分析数据表明miR-207组L1、P75蛋白表达量升高，GFAP、S100蛋白表达量下降； miR-125b-5p组蛋白表达量均下降；miR-126a-3p组L1蛋白表达量与对照组相同，GFAP蛋白表达量升高， P75、S100蛋白表达量均下降。结论:三种microRNA对雪旺细胞均有调控作用，而microRNA- miR-207作用较为突出，利用成熟的microRNA- miR-207可诱导雪旺细胞转化为类嗅鞘细胞，使雪旺细胞高表达嗅鞘细胞特异性标记蛋白P75、L1。