益气化瘀方干预子宫复旧不全大鼠子宫内膜边缘群细胞的实验研究

Incomplete puerperal involution of uterus is refers to the uterine smooth muscular can't contraction and rehabilitation of a muscle by the scheduled time.The main clinical manifestations included iteration or continuation of lochia and postpartum abdominal pain. Based on this conclusion, secondary infection occurred.Incomplete puerperal involution of uterus is an important reason of postpartum disease,such as postpartum lochiorrhea、postpartum abdominal pain、 infection 、post-partum hemorrhage.Incomplete puerperal involution of uterus has been estimated to affect mothers .Studies showed that traditional Chinese medicine has possitive therapeutic effect on postpartum lochiorrhea and postpartum abdominal pain,But the mechanism is not clear.Preliminary studies are mainly focused on collagen degradation and Endometrium repairing.Based on the early works,We abstract side population from endometrium in incomplete puerperal involution of uterus.To study the regulation effects of Yiqihuaqu Decoction on proliferation and differentiation of side population from endometrium in Incomplete puerperal involution of uterus.To explore the relationship between the Content of side population and estrogen leels in serum and estrogen receptors in uterine.Make sure about effect and mechanism of side population during the course of endometrium regeneration .To explore the target for the Yiqihuaqu Decoction to promote Uterine Involution. It has important directive to Prevention and cure of postpartum disease.

子宫复旧不全指子宫体肌纤维不能如期缩复和子宫内膜再生障碍，临床主要表现为血性恶露持续淋漓不尽或反复间歇性血性恶露和产后腹痛，在此基础上继发感染。子宫复旧不全是诱发各种产后疾病的重要原因，如恶露不绝、腹痛、感染、产后出血等，严重影响妇女身心健康。临床研究表明中医药治疗产后恶露不绝、产后腹痛具有肯定疗效，然而药物作用机制尚不明确。我们前期研究集中在胶原降解和内膜修复两个方面。本研究拟在前期研究基础上，从子宫复旧不全大鼠子宫内膜中提取边缘群细胞。通过研究益气化瘀方对子宫复旧不全动物模型大鼠子宫内膜边缘群细胞增殖分化的调控作用，探讨大鼠子宫内膜边缘群细胞含量的变换与产后大鼠血清中雌激素水平及子宫组织雌激素受体的变化趋势的相关性，进而明确边缘群细胞在子宫内膜再生过程中的作用及其机制，探索益气化瘀方促进产后子宫复旧的作用靶点，对多种产后疾病的预防和治疗具有重要的指导意义。

子宫复旧不全是诱发多种产后疾病的重要因素，如恶露不绝、腹痛、感染、产后出血等，影响妇女身心健康。中医药治疗子宫复旧不全具有肯定疗效，但研究多集中在临床研究，药物作用机制尚不明确。本研究在前期动物实验研究基础上，采用Hoechst33342-SP法从大鼠子宫内膜中分离和纯化边缘群细胞, 试图研究益气化瘀方促进产后子宫修复的作用靶点及机制。获得研究结果如下：1）通过产后子宫内接种大肠杆菌导致子宫内膜炎，成功制备子宫复旧不全大鼠模型，为产后相关疾病研究提供实验模型。2）采用酶学与机械分离结合法分离子宫内膜细胞，与维拉帕米对照，流式细胞仪分选大鼠子宫内膜边缘群细胞。3）测定产后不同时期血清中E2水平、产后7d血清中E2、P、PRL水平、产后7d子宫内膜组织及细胞ER蛋白、基因含量。结果提示子宫复旧不全模型E2及ER水平下降，产后缓慢回升，影响子宫内膜增生修复。益气化瘀方能提升E2及ER水平，调节雌孕激素同步发展,促进内膜迅速增生修复剥脱的创面止血，促进产后子宫复旧，这是益气化瘀方作用靶点及机制之一。4）测定模型大鼠血液流变学指标及血清中NO、NOS和t-PA含量，证实模型大鼠存在血液高凝状态和继发性纤溶亢进状态，进一步证实模型满足血瘀证动物模型要求。益气化瘀方能改善产后血液的粘滞状态，加速血液循环，促进产后余血的排出。同时降低t-PA高水平，降低血液粘滞程度，抑制瘀血形成，促进新血再生，促进产后子宫复旧，这是益气化瘀方作用靶点及机制之二。5）测定子宫内膜中凋亡抑制因子Bcl-2蛋白和凋亡促进因子bax蛋白，证实益气化瘀方能调节上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白的表达，降低子宫内膜细胞凋亡的发生，促进子宫内膜增生修复。这是益气化瘀方作用靶点及机制之三。6）测定Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin和APC蛋白，证实益气化瘀方提高β-catenin基因水平，降低APC蛋白水平，促进血管再生，这可能是益气化瘀方作用靶点及机制之四。总之，本研究探索益气化瘀方促进产后子宫复旧的作用靶点，全面剖析了其作用机制，为多种产后疾病的预防和治疗具有重要的指导意义。