用细菌传递RNA干扰经肠道黏膜免疫系统治疗艾滋病毒感染

研究表明RNA干扰药物有望对抗艾滋病毒感染。肠道黏膜免疫系统是艾滋病毒进入机体和复制的重要部位。艾滋病毒溶解性复制清除小肠肠膜腔中的CD4、CCR5双阳性效应T细胞，导致肠道黏膜免疫系统的破坏，引发机会感染并造成死亡。治疗艾滋病毒感染的关键在于靶向、特异地将干扰RNA传递到肠道黏膜免疫系统中的CD4阳性T细胞。本项目利用申请人发明的"跨界基因沉默"技术，拟将与艾滋病毒复制和装配相关的多个基因（gag-pol-nef）的嵌合型长片段双链RNA(chimeric dsRNA)通过细菌剪切成效应混合物，并依赖Invasin-β1-integrin和gp120-CD4的配体-受体结合经派伊尔的补丁传递到肠道黏膜免疫系统，阻止CD4、CCR5双阳性效应T细胞的清除，以达到治疗艾滋病的效果。本项目研究的新型艾滋病治疗方法，也将为应用RNA干扰技术预防和治疗其他重大病毒性传染病提供理论依据。

本研究旨在探索以“跨界基因沉默”系统为基础的“多基因嵌合型RNA干扰”技术能否预防和治疗艾滋病感染。我们证实携带dsTRIP质粒的细菌能进入淋巴细胞，但存在一定的毒性；在成功改建dsTRIP减毒质粒的基础上，为增强细菌表达及传递嵌合体双链RNA的稳定性，我们利用RED/ET重组系统完成了重组菌株的构建；并选定了能有效维持细菌活性与稳定性的微囊包埋条件；构建了稳定表达gag，pol和nef的HeLa细胞株；为进一步在动物模型与临床病人血细胞中研究抑制HIV病毒复制奠定了基础。