基于不同剂量IL-2干预circRNA-7/IL-17A信号通路研究2型糖尿病肾病模型抗纤维化的作用机制

Low-dose recombined interleukin-2 (IL-2) independently ameliorate the autoimmune diseases such as lupus nephritis via regulating T cell subsets, but little is known about whether IL-2 can treat immunity-associated diabetic nephropathy. Our preliminary experimental results showed that IL-2 deficiency in type 2 diabetic nephropathy （T2DN）, the treatment effect of recombined IL-2 on T2DN still need further discussion. To this end, we hypothesized that different doses, especially low-dose recombined IL-2 altered renal fibrosis in T2DN through the circRNA-7 / IL-17A signaling pathway. In our study, type 2 diabetic nephropathy mice model - db/db mice and primary renal tubular epithelial cell model were created, in situ hybridization, immunohistochemistry, flow cytometry and circRNA-7 / IL-17A siRNA interference were uesd in multilevel, from animals, cell and molecular level, to explore the important role of recombined IL-2 on anti-fibrosis in T2DN via mesangial epithelial mesenchymal transition through circRNA-7 / IL-17A signaling pathway. These foundings will provide a novel therapeutic strategy for low-dose recombined IL-2 in the treatment of T2DN, and offer the evidence for the immune homeostasis in T2DN.

小剂量白介素-2（IL-2）可通过调控T细胞亚群平衡治疗自身免疫性疾病，但IL-2能否干预与免疫相关的糖尿病肾病尚不清楚。课题组预实验结果发现2型糖尿病肾病（T2DN）中肾脏组织IL-2表达下调， 为此提出：不同剂量，尤其是小剂量IL-2是否通过circRNA-7/IL-17A信号通路改变了T2DN中肾脏纤维化？为验证这一假说，课题组将通过db/db小鼠和原代肾小管上皮细胞模型，采用原位杂交、免疫组化、流式细胞术和circRNA-7/IL-17A siRNA干扰等手段，从动物、细胞以及分子水平等多方面探讨IL-2通过circRNA-7/IL-17A对肾小管上皮间充质转化的调控机制，明确IL-2在T2DN中发挥抗纤维化的重要作用。本研究将从小剂量IL-2治疗T2DN这个新视点为免疫稳态参与T2DN提供理论支持。

低剂量的白介素-2通过调控T细胞亚群平衡发挥免疫抑制作用，治疗系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病，但是对T2DN的治疗效果如何尚不清楚。因此，提出假设：小剂量IL-2通过CircRNA-7/IL-17调节了Th17/Treg细胞失衡，改善了T2DN中胰岛素抵抗和肾脏纤维化。研究结果发现：T2DN小鼠肾组织和高糖诱导的NRK-52E细胞中IL-2的表达增高， 而T1DN小鼠中低表达；还发现T2DN小鼠肾IL-2高表达与肾脏纤维化正相关，提示IL-2在T1DN和T2DN肾脏纤维化中可能扮演不同的角色。进一步在STZ 诱导的DKD小鼠中予以小剂量IL-2不能降低其升高的血糖和尿糖。相反，腹腔注射IL-2受体抗体能够改善STZ诱导小鼠12w和16w肾功能指标，使系膜指数下降、肾胶原纤维减少，提示阻断IL-2受体可改善其肾小管间质病变。但是，在阻断IL2R的DKD小鼠肾脏中观察到Th17/Treg比例失衡，CD+4T细胞无变化，提示IL-2受体阻断可能会引起肾脏免疫紊乱。有趣的是，课题组发现在瘦素受体敲除鼠（db/db）中阻断IL-2受体后肾脏F4/80+细胞数量降低，但是在STZ诱导的DKD小鼠中没有变化，提示瘦素和IL-2表达升高有关系。通过细胞实验及分子对接分析证实，瘦素可能通过非瘦素受体(TLR2)途径上调肾小管上皮细胞IL-2的表达。circRNA-7/IL-17是否参与IL-2诱导的T2DN肾脏纤维化，课题组观察到肾小管细胞中的circRNA-7表达水平极低难以定量，IL17A在糖尿病肾病不同病程时期的表达呈现先增高后降低的趋势，提示circRNA-7/IL-17A与T2DN模型鼠的肾脏纤维化进程不一致，可能未参与肾脏纤维化进程，还需要进一步寻找调控IL-2的更有效途径。