LncRNA WEE2-AS1受HBx蛋白调控及其在肝癌中的作用与机制研究

Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the most important etiologies for the high morbidity and poor prognosis of hepatocellular carcinoma (HCC). Recently, evidence have shown that long noncoding RNA (lncRNA) paly important role in HCC, while the mechanisms involved in the HBV related HCC remain unclear. We screened the differentially expressed lncRNA related to HBV in HCC by microarray analysis, and found that WEE2-AS1 was overexpressed in HCC cell lines and tissues, especially those with HBV infection. The overexpressed WEE2-AS1 was negatively correlated with prognosis. Joint survival analysis showed that the prognosis was worst in HBV positive patients with overexpressed WEE2-AS1. Further study preliminarily confirmed that hepatitis B virus x protein (HBx) could up-regulate the expression of WEE2-AS1 in cell lines. Therefore, we propose that WEE2-AS1 could be regulated by HBx, and plays an oncogenic role in HCC. Next, we will optimize the analysis of clinical data, and further investigate the fundamental mechanisms involved in the expression of WEE2-AS1 regulated by HBx. Then we will investigate the biological functions and mechanisms of downstream pathways regulated by WEE2-AS1 in HCC. Finally, we will confirm the mechanisms above in mouse models and clinical specimens. This study will help better elucidate the pathogenesis of HBV related HCC, and provide basis in exploring new therapeutic targets for HCC.

HBV感染是我国肝癌多发及预后较差的重要原因之一，近期研究显示长链非编码RNA在肝癌中也具有重要作用，但其在乙肝相关肝癌中的作用机制尚不明确。我们通过芯片筛选肝癌中与HBV相关的差异表达lncRNA，发现WEE2-AS1在肝癌细胞系及肝癌组织，尤其是HBV相关的细胞及组织中高表达，且与患者预后成负相关。联合生存分析提示HBV感染合并WEE2-AS1高表达患者，预后最差。在细胞系中也初步证实HBx（乙肝病毒x蛋白）可以上调WEE2-AS1表达。我们推测WEE2-AS1受HBx调控，且在肝癌中发挥促癌作用。接下来，本课题将进一步完善临床样本资料的汇总分析；对HBx调节WEE2-AS1表达的具体机制进行研究；探索WEE2-AS1在肝癌中的细胞生物学功能及其下游通路调控机制；最后在小鼠模型及临床样本中验证相关机制。本研究将有助于更好地揭示乙肝相关肝癌的发生机制，为寻找临床治疗新靶点提供借鉴。

长链非编码RNA是目前研究的热点，在肝癌中也具有广泛而重要的作用。但目前关于乙肝相关肝癌中lncRNA功能的研究相对较少，对于其在肝癌中的具体作用机制目前尚不明确。本项目在执行过程中主要探讨乙肝相关肝癌中HBx调控WEE2-AS1发挥促癌作用的具体机制，以及阐明并验证WEE2-AS1下游通路及直接作用靶点，研究WEE2-AS1与下游靶点相互作用机制。主要发现为：HBV感染与HCC组织中WEE2-AS1表达呈正相关，而WEE2-AS1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和细胞周期进展，而凋亡受到抑制。这些发现为进一步完善HBx蛋白促肝癌侵袭转移机制，以及WEE2-AS1的促癌机制提供实验证据；本项目另一实验，在执行过程中主要探讨LncRNA HIS和LINC01352发挥促癌作用的具体机制，以及阐明并验证其下游通路、直接作用靶点及相互作用机制。主要发现为：1.LINC01352通过ERα被HBx下调，并且在HCC患者中与更好的预后相关；2.LINC01352通过海绵细胞miR-135b发挥肿瘤抑制作用，导致APC上调，从而抑制Wnt/β-catenin信号通路；3.LncIHS在肝癌中过表达，降低了肝癌患者的生存率。敲除LncIHS可抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖；4.LncIHS正调控上皮间充质转化相关标志物c-Myc和Cyclin D1的表达，以及ERK-和akt信号通路的激活。这些发现为进一步完善HBx/HBV及lncRNA促肝癌侵袭转移机制提供实验证据。.乙型肝炎病毒感染在肝癌发生中起着重要作用，尤其是在肝细胞癌中，但目前关于HBV在肝癌中的具体作用机制目前尚不明确。本项目在执行过程中主要阐明PTPN13在HBV相关性肝癌中参与的功能和具体机制。主要发现为：1.PTPN13和胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)，通过影响c-Myc mRNA的稳定性来调节代谢重编程；2.HBx下调PTPN13的表达，从而通过干扰IGF2BP1的功能，对细胞增殖和肿瘤发生产生负面影响；这一发现为进一步完善HBx/HBV促肝癌侵袭转移机制提供实验证据。