Ezrin和TRIP-1蛋白的相互作用机制、信号转导通路及其对肿瘤转移作用的研究

肿瘤转移是一个涉及多基因及其信号通路变化的复杂过程，了解相关基因的信号转导机制对寻找抑制肿瘤转移的关键靶点具有重要的意义。Ezrin高表达与肿瘤转移密切相关，它可通过多种信号通路参与肿瘤细胞内信号转导影响恶性肿瘤的转移。TRIP-1是TGF-β信号通路的调节因子，而TGF-β在肿瘤发生发展中具有在起始阶段肿瘤抑制而在进展期促进肿瘤细胞浸润转移的双重作用。我们前期研究证实Ezrin可与TRIP-1结合。但是Ezrin和TRIP-1之间的相互作用机制及其对各自参与的信号转导通路之间存在什么样的联系尚不清楚，本课题拟采用GST pull-down, Co-IP, 荧光共定位等方法， 研究Ezrin与TRIP-1之间的结合区域，分析相互作用位点；有针对性的考察Ezrin与TRIP-1的结合分别对Ezrin和TRIP-1的蛋白功能及其相应信号通路的影响，进而阐明两者相互作用对肿瘤细胞迁移的影响。

肿瘤发生、发展及其转移是一个复杂的生物学过程，其中涉及众多基因的表达及其调控。本研究采用GST pull-down, Co-IP, 荧光共定位等方法， 研究Ezrin 与TRIP-1之间的相互作用关系；有针对性的考察Ezrin 与TRIP-1 的结合对Ezrin和TRIP-1蛋白的功能及其信号通路的分子机制，进一步阐明其对肿瘤细胞迁移的影响。研究发现：（1）Ezrin和TRIP-1之间存在直接的物理相互作用，确定了Ezrin 蛋白第567 位氨基酸和TRIP-1 蛋白FERM 结构域中最后的20 个氨基酸是两者之间结合的关键位点。（2）降低TRIP-1的表达可以导致Ezrin磷酸化活性的上升并促进Hela肿瘤细胞丝状伪足的形成。（3）TRIP-1影响细胞伪足形成的过程受TGF-β信号通路的调控，它主要是通过控制Ezrin的磷酸化和亚细胞定位来实现。（4）降低TRIP-1的表达可以增强肿瘤细胞粘附和迁移能力，而TRIP-1的过表达可以抑制Ezrin诱导的肿瘤细胞迁移。上述结果证实了TRIP-1可以通过与Ezrin的相互作用发挥肿瘤迁移的抑制功能，为恶性肿瘤的防治提供一个新靶点。