毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）在乙肝相关性肝纤维化进程中的意义

Despite the close association of inflammation with liver fibrosis, little is known about their cellular cross-talks. Our previous data indicated peripheral CD4+ cells of CHB patients expressed high levels of cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4 (CTLA-4), and regulated the pro-fibrotic features of hepatic stellate cells (HSCs). HSCs, the cornerstone of liver fibrosis, express B7-1 (ligand of CTLA-4) and present antigens. Thus, this research is designed to investigate whether CTLA-4 regulates the fibrotic features of HSCs through its effects on cytokine response induced by CD4+ cells (IFN-γ、IL-4、IL-17) or through the direct CTLA-4/B7-1 interaction, and to investigate the significance of these two pathways during liver fibrosis by the additions of monoclonal antibodies to block CLTA-4 and its downstream effector molecules in both in-vitro co-cultures and in-vivo mouse liver fibrosis models. Findings will contribute to our understanding of cross-talks between inflammation and fibrosis signal pathways, and make a theoretical foundation for future immunotherapy of liver fibrosis.

肝纤维化的发生发展与免疫炎症反应密切相关，但机制不明。我们前期工作证实慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T细胞可显著上调表达毒性T淋巴细胞相关抗原-4 (CTLA-4)，并参与调控肝星状细胞（HSCs）的促纤维化特性。HSCs是肝纤维化的核心细胞，且具有抗原递呈功能，可表达共刺激分子B7-1(CTLA-4的配体)。本研究以CTLA-4为切入点，从HSCs和CD4+T细胞间相互作用出发，利用单克隆抗体阻断共培养体系及小鼠肝纤维化模型中CTLA-4及可能的下游分子如CD4+T功能因子IFN-γ、IL-4、IL-17或其配体B7-1，探讨 CTLA-4能否通过影响CD4+T细胞应答或影响CTLA-4/B7-1信号通路调控HSCs的促纤维化特性，及CTLA-4的上述调控功能在肝纤维化进程中的意义。研究结果将有助于我们深入理解炎症和纤维化信号通路之间的联系，为免疫治疗肝纤维化打下坚实理论基础。

肝纤维化的发生发展与免疫炎症反应密切相关，但机制不明。肝星状细胞（HSCs）是促肝纤维化的核心细胞，新发现其可表达共刺激分子参与抗原递呈活动，调控CD4+T的激活与增殖。慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血及肝组织局部免疫抑制分子——毒性T淋巴细胞相关抗原-4 (CTLA-4)的表达显著上调，其重要配体为共刺激分子B7-1。本研究从HSCs和CD4+T细胞间相互作用出发，初步探讨了CTLA-4信号通路在肝纤维化进程中的意义。慢性HBV感染者的数据表明，免疫耐受组（IT）较慢性乙型肝炎组（CHB）外周血及肝组织局部的CTLA-4表达水平进一步上调；本研究动态随访36例HBeAg+CHB患者的替比夫定抗病毒治疗过程52周，发现完全应答较部分应答及无应答的患者外周血CD4+T细胞的Treg/Th17比值及CTLA-4表达水平显著下调，且HSCs与CD4+T的体外共培养研究表明抗病毒治疗所重塑的CD4+T稳态（高Th1/Th2、Th17/Treg比值，低CTLA-4水平）可通过不依赖CTLA-4的方式抑制HSCs的增殖及促纤维化因子的分泌；我们还发现，HBeAg+CHB患者外周血Treg细胞可依赖CTLA-4显著抑制活化的HSCs分泌高迁移率组蛋白（HMGB1），HMGB1一方面可依赖TLR-4-IL-6旁路显著上调Th17/Treg比例从而间接影响CD8+T抗病毒能力另一方面还可通过自分泌的方式促进HSCs激活、迁移、增殖及细胞因子分泌。在ConA诱导的小鼠免疫性肝纤维化模型中，肝汇管区CTLA-4、HMGB1表达显著上调，尾静脉注射anti-CTLA-4单抗可显著上调HMGB1的表达并促进CD4+T细胞分泌IL-17、HSCs激活及肝纤维化进展，而尾静脉输注脾脏来源的Treg细胞可显著下调HMGB1旁路并改善ConA诱导的肝纤维化。研究结果有助于我们深入理解肝纤维化免疫微环境中炎症和纤维化信号通路之间的联系。本研究已基本完成预期目标，目前已发表SCI论著1篇，1篇SCI论著投递中，SCI收录会议摘要2篇，国际权威会议大会发言1次，壁报交流1次。