Sema4C调节卵巢淋巴管新生和卵巢功能的作用及机制研究

Reproductive endocrine disease caused by ovarian dysfunction seriously affects the physical and mental health of women. Lymphatic vessels in the ovary are periodically renewed and reconstructed with the menstrual cycle, regulating follicular development by affecting ovarian microenvironment. Sema4C is a novel marker of lymphatic endothelial cells and regulates lymphangiogenesis, which was first revealed by our study group. Preliminary results confirm that Sema4C is highly expressed in the lymphatic vessels around the follicles; PlexinB2 is highly expressed in granulosa cells. Intraperitoneal injection of Sema4C antibody significantly affected the pregnancy outcome of mice. Therefore, the aim of this project is to determine the effect of Sema4C on ovarian microenvironment by detecting the mode of action of Sema4C in the ovary (autocrine or paracrine), then using the in vivo and in vitro methods to detect the effect of Sema4C on Ovarian ultrastructure， lymphangiogenesis, hormone secretion and follicular in mice. This aims to provide valuable target and theoretical basis for the treatment of related diseases.

卵巢功能异常引起的生殖内分泌疾病严重困扰着广大女性的身心健康，甚至会破坏家庭和谐及社会安定。卵巢内淋巴管伴随月经周期进行周期性的新生和重建，通过影响卵巢微环境来调节卵泡发育。Sema4C是本研究组前期实验中首次发现的新生淋巴管内皮细胞标记分子，调控淋巴管新生。初步实验结果证实Sema4C在卵泡周围淋巴管高表达，其受体PlexinB2在颗粒细胞高表达。腹腔注射Sema4C抗体显著影响小鼠的妊娠结局。因此，本项目拟首先通过检测卵巢中Sema4C的作用方式（自分泌？旁分泌？）来明确Sema4C对卵巢微环境的影响，进而采用体内及体外实验检测Sema4C对小鼠卵巢超微结构、淋巴管生成、性激素分泌及卵泡发育的影响，旨在为相关疾病的治疗提供有价值的靶点和理论依据。

卵巢功能决定生殖内分泌状态，关乎女性的生活质量、家庭和谐及社会安定。Sema4C是本研究组前期实验中首次发现的新生淋巴管内皮细胞标记分子，调控淋巴管新生。淋巴管是卵巢微环境的重要成分，与卵巢功能密切相关。因此，Sema4C可能通过影响卵巢微环境调控卵巢功能。 .本项目采用体内外实验检测了Sema4C在小鼠卵巢组织中的表达，以及Sema4C调节卵巢淋巴管新生和卵巢功能的作用,结果显示Sema4C及其受体PlexinB2在3周龄（相当于8.6岁女性）至48周龄（相当于41岁女性）的小鼠卵巢组织中均有表达，但表达水平随着小鼠年龄增加而显著降低，Sema4C主要表达于生长卵泡的卵泡膜细胞和卵巢间质细胞，PlexinB2主要表达在颗粒细胞和卵泡膜细胞。同时，卵巢内淋巴管计数也随着小鼠年龄的增加显著减少，相关性分析显示不同年龄阶段的小鼠卵巢组织中Sema4C的表达水平和淋巴管计数的一致性良好。体外实验结果显示，siRNA干扰Sema4C/PlexinB2后，卵泡膜细胞/颗粒细胞的增殖抑制，衰老细胞数显著增多，分泌的雌、孕激素水平显著降低。为获得持续而稳定的体内干扰效应，本项目采用卵巢囊内注射的方法将携带Sema4CshRNA的腺相关病毒（pAV-4in1Sema4CshRNA-GFP）及对照空载体病毒（pAV-4in1VectorshRNA-GFP 无义序列）分组注射，结果显示干扰Sema4C组小鼠的卵巢中始基卵泡、次级卵泡数和窦状卵泡数明显减少，闭锁卵泡数显著增多，而血浆中AMH和雌激素水平降低。.本项目研究结果提示，Sema4C促进小鼠卵泡发育及性激素分泌，抑制卵泡闭锁及始基卵泡池激活，保护卵巢的生殖内分泌功能，推测其机制①Sema4C介导卵泡膜细胞与颗粒细胞之间的交互作用，②Sema4C调节微环境（淋巴管新生），间接促进卵泡发育，维持正常卵巢功能。具体信号途径及关键分子有待深入研究。.本项目首次揭示Sema4C调控卵巢功能，扩展了sema4C的研究领域，同时为卵巢功能减退导致的生殖内分泌疾病提供了新的研究思路，具有重要的理论意义及应用前景。