转录因子MAZ调控去势抵抗性前列腺癌发展的作用及机制研究

Castration resistant prostate cancer (CRPC) brings patients difficultis and challenges during prostate cancer therapy. Our previous study demonstrates that MAZ regulates the expression of androgen receptor(AR),which is highly correlated to castration resistant procedure of prostate cancer. The result shows that MAZ promotes the proliferation of CRPC cells without AR. However, the effect and mechanism of MAZ for CRPC progression remains undefined.We hypothesize that MAZ promotes CRPC proliferation and led to Invasion and metastasis through AR or non-AR passway. With modern molecular biology methods, we are programming to assess the effect of MAZ for CRPC in cell models and mouse models by AR/non-AR passway,and evaluate the viability of Inhibition of CRPC progress by knocking down MAZ genes. Thus the study may reveal the theoretical foundation and experiment evidence for exploring the mechanism and pathways of CRPC progression, which could provide new molecular target for CRPC therapy.

去势抵抗性前列腺癌（CRPC）是前列腺癌治疗的难点和挑战。本课题组通过前期工作首次报道了MAZ可反馈调控与前列腺癌去势抵抗高度相关的雄激素受体（AR）表达，对CRPC细胞具有促进增殖的作用。但其参与CRPC发展的具体分子通路和调节机制还不清楚。我们推测MAZ可能通过AR及非AR通路，促进CRPC细胞增殖生长，导致侵袭转移。我们拟应用前列腺癌细胞模型和前列腺癌小鼠模型，通过现代分子生物学的方法，探讨MAZ调节AR活性及通过非AR通路对CRPC进展的影响，观察沉默MAZ抑制CRPC进展的可行性，为揭示CRPC发生发展相关分子机制和信号通路奠定理论和实验基础。本课题的成功实施有望为治疗CRPC提供新的分子靶点，具有重要的科学意义和应用价值。

背景：前列腺癌的转移、雄激素非依赖与去势疗法抵抗型前列腺癌的发生与多种转录因子以及下游的信号通路的改变有着密切联系。本实验室前期的研究发现，MAZ是可能受到雄激素受体调控的一个转录因子，并且在前列腺癌中具有关键的功能。我们进行了以下实验：1、用实时定量PCR的方法检测不同PCa细胞系中MAZ表达量，以及不同浓度、不同时间的双氢睾酮的刺激下，LNCaP细胞系中MAZ的表达量。通过siRNA敲除的方法检测LNCaP中MAZ在转录和翻译水平的表达量；2、用染色质免疫共沉淀以及双荧光酶检测的方法鉴定LNCaP中AR在MAZ启动子区的结合位点以及调控的功能。3、在敲除了MAZ的LNCaP细胞中用CCK-8检测其在多西他赛环境下的存活情况，并与对照组进行比较，研究MAZ对化疗药物抵抗的影响。并用表达谱芯片的方法探索MAZ下游的调控网络，以研究MAZ影响多西他赛敏感性的通路分子。得到了如下结果：1、MAZ的mRNA 相对表达量在AR阳性、雄激素依赖的LNCaP细胞系中最高，其次高的是AR阳性但是雄激素非依赖的22RV-1以及C4-2 细胞（与LNCaP细胞的表达量相近），而在AR阴性且雄激素非依赖的DU-145和PC3 细胞中表达最低。Western Blot和qPCR的实验结果表明，转染了AR siRNA 的LNCaP细胞MAZ的蛋白表达降低。MAZ的表达量对双氢睾酮的刺激呈浓度依赖以及时间依赖反应。随着双氢睾酮给药浓度的增加和作用时间的延长，LNCaP细胞中MAZ的表达量逐渐上升。2、ChIP实验鉴定出MAZ启动子区域上的2个可能的AR调控位点：片段-237~+58以及片段-424~-259。双荧光酶实验证实片段-237~+58为AR可调控的启动子区域调控位点。3、CC-8实验显示，在加入docetaxel之后检测浓度梯度和时间梯度，显示对比NC组，转染了siMAZ的LNCaP细胞对化疗药的敏感性增强。表达谱芯片结果显示结果中显示Bcl-2基因在MAZ敲除后有稳定的下调趋势。而qPCR和western-blot结果证实敲除MAZ后，Bcl-2的表达下调。证实MAZ可通过Bcl-2途径降低LNCaP细胞对多西他赛的敏感性。揭示了MAZ在前列腺癌发生发展中起到了重要作用，可能以此为突破点进行预后模型的建立和治疗靶点的开发。